Page 19 - 《中国药房》2024年2期
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健脾化浊调脂颗粒（Jianpi huazhuo tiaozhi granules，      医药大学实验动物伦理委员会审查通过（批准文号
          JHTG）是江西中医药大学附属医院刘中勇教授在“浊邪                         JZLLSC20230748）。
          致病”“从浊论治”的基础上，根据“胸痹心痛”“本虚标                         2 方法
          实”的病理特点及多年临床经验所创立的可用于治疗动                           2.1 供试品溶液的制备
          脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）的经验方。该方以党                     称取 JHTG 100 mg，置于 15 mL 离心管内，加 50%
          参、荷叶为君药，茯苓、丹参、白术、木香、陈皮为臣药，佐                        甲醇10 mL，超声30 min，取上清液1 mL置于离心管中，
          以薏苡仁、丝瓜络、山楂、砂仁、泽泻、麦芽，以达到健脾                         以14 000 r/min离心5 min，取上清液，经0.22 μm微孔滤
          益气、祛湿化浊之功。虽然本课题组前期研究证实了                            膜滤过，取续滤液，即得。
          JHTG 的临床疗效及其抗 AS 的作用           [1―2] ，但中药复方化       2.2 对照品溶液的制备
          学成分复杂，入血后各成分的变化情况及发挥药效的物                               分别称取“1.2”项下各对照品适量，加 50% 甲醇溶
          质基础并不明确，不利于揭示JHTG治疗AS的内在作用                         解，制成质量浓度均为0.1 mg/mL的混合对照品储备液；
          机制。                                                精密量取上述混合对照品储备液 1 mL，以 50% 甲醇稀
              血清药物化学方法是通过检测血清中的化学物质                          释，制成质量浓度均为20 μg/mL的混合对照品溶液，经
          来分析外源性活性物质及其作用和代谢规律的新方法，                           0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
                                                       [3]
          在中药及其复方的药效物质基础研究领域应用广泛 。                           2.3 灌胃药液的制备
          超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）技术能够快                          取 JHTG 适量，以水为溶剂，制成质量浓度为 0.7
          速准确地检测和定量分析复杂化合物。基于此，本研究                           g/mL 的药液。上述质量浓度参照 JHTG 成人临床常用
          借助血清药物化学方法，以 UPLC-MS/MS 技术为检测                      日剂量并按大鼠体表面积折算而得。
          手段，对JHTG的化学成分及入血成分（含原型成分及代                         2.4 样本采集与处理
          谢产物）进行分析，以期为该方药效物质基础的阐释及                               将 12 只 SD 大鼠随机分为空白组和给药组，每组 6
          院内制剂的进一步开发提供实验依据。                                  只。禁食、不禁水12 h后，给药组大鼠灌胃JHTG药液3
          1 材料                                               mL，空白组大鼠灌胃等体积生理盐水。灌胃60 min后，
          1.1 主要仪器                                           于大鼠眼内眦静脉丛取血0.5 mL，室温下静置2 h后，于
              本研究所用主要仪器包括 Synapt G2-Si 型质谱仪、                 4 ℃下以3 000 r/min离心10 min，取上层血清，于－80 ℃
          ACQUITY UPLC Ⅰ Class system 型液相色谱系统（美              下冻存，备用。
          国 Waters 公司），XSE205DR 型电子天平（瑞士 Mettler                 取同组大鼠的血清样品，等体积混合以消除个体差
          Toledo公司），Vortex-2 Genie型涡旋混合器（美国Scientific        异。取空白组大鼠血清样品（即空白血清样品）和给药
          Industries 公司），5810R 型低温离心机（德国 Eppendorf           组大鼠血清样品（即含药血清样品）各 100 μL，加乙腈
          公司），WD-9415C 型超声波清洗器（北京六一生物科技                      500 μL，涡旋混匀 2 min 后，再以 14 000 r/min 离心 5
          有限公司），Milli-Q 型超纯水净化系统（美国 Millipore                min，取上清液500 μL，置于进样瓶中，备检。
          公司）等。                                              2.5 色谱与质谱条件
          1.2 主要药品与试剂                                            以 Waters ACQUITY UPLC HSS T3（2.1 mm×100
              JHTG[专利号ZL2015104300758，批号20221011，规           mm，1.8 μm）为色谱柱，以0.1%甲酸水溶液（A）-0.1%甲
          格为每袋10 g（相当于原药材23.54 g）]由江西中医药大                    酸乙腈溶液（B）为流动相进行梯度洗脱（0～15 min，
          学附属医院提供；茯苓酸、白术内酯Ⅱ、泽泻醇 A、泽泻                         100%A；15～50  min，100%A→80%A；50～60  min，
          醇B、土木香内酯、乙酸龙脑酯、丹酚酸A、丹酚酸C对照                         80%A→100%B；60～70 min，100%B→100%A）；流速为
          品（批 号 分 别 为 MUST-23071117、MUST-22111604、           0.25 mL/min；柱温为35 ℃；进样量为10 μL。
          MUST-22110115、MUST-23060414、MUST-23053107、             在电喷雾离子源（electrospray ionization，ESI）正、负
          MUST-23062702、MUST-23032107、MUST-23071312，纯        离子模式下进行扫描，质量扫描范围为50～1 500 Da；毛
          度均不低于 98%）均购自成都曼思特生物科技有限公                          细管电压为 3 kV（正离子模式）、2.5 kV（负离子模式）；
          司；乙腈、甲醇、甲酸均为色谱纯，其余试剂均为分析纯，                         锥孔电压为 40 V；碰撞能为 10～50 eV；离子源温度为
          水为去离子水。                                            125 ℃；脱溶剂温度为 500 ℃；锥孔气流速为 50 L/h，脱
          1.3 实验动物                                           溶剂气流速为800 L/h；分析时间为80 min。
              健康SPF级雄性SD大鼠12只，体重（200±20）g，由                  2.6 数据处理
          江西中医药大学提供，动物生产许可证号为SCXK（赣）                             采用 UPLC Ⅰ Class 和 Synapt G2-Si Qtof 软件进行
          2022-0001。所有大鼠均饲养于室温（22±2）℃、相对湿                    JHTG 化学成分的色谱分离和质谱数据采集，结合
          度（55±15）%、每12 h明暗交替的环境中，自由摄食、饮                     UNIFI天然产物整体解决方案，基于6400天然产物理论
          水，适应性喂养1周后开始实验。本实验方案经江西中                           质谱数据库对成分进行数据处理。由于JHTG所含化学


          中国药房  2024年第35卷第2期                                                 China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 2    · 141 ·
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