Page 63 - 《中国药房》2023年24期
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can  reduce  the  lung  injury  caused  by  RSV，  the  mechanism  of  which  may  be  associated  with  relieving  inflammation，  regulating
          gastrointestinal hormone levels， the percentage of lymphocytes and the abundance of beneficial and harmful bacteria in the intestinal
          tract.
          KEYWORDS    Dayuanyin decoction； respiratory syncytial virus； Hanshi yufei syndrome； gut microbiota



              呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV）       根茎，毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根，
          属副黏病毒科，是引起婴幼儿下呼吸道感染的常见病原                           唇形科植物黄芩 Scutellaria baicalensis Georgi 的干燥
                [1]
          体之一 。对于 RSV 的防治，目前世界范围内尚无特异                        根，豆科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch. 的干燥根
          性药物和疫苗。中医药治疗病毒感染具有多成分、多途                           和根茎。
          径、多靶点的独特优势，其不仅针对某一特定病毒，而且                              利巴韦林原料药（批号J1202A，纯度≥99%）购自大
          可就病因病机进行辨证论治。RSV 感染属中医“疫病”                         连美仑生物技术有限公司；异氟烷（批号20092202）购自
          范畴，有证据表明在寒湿环境下，机体对 RSV 的易感性                        深圳市瑞沃德生命科技有限公司；小鼠白细胞介素6（in‐
                  [2]
          有所增加 。达原饮源自《温疫论》，由槟榔、厚朴、草果、                        terleukin-6，IL-6）、IL-1β 酶联免疫吸附测定（enzyme-
          知母、芍药、黄芩、甘草7味药组成，可开达膜原、辟秽化                         linked immunosorbent assay，ELISA）试剂盒（批号分别为
          浊，治疗疟疾、瘟疫邪伏膜原等病证。现代药理学研究                           A21020726、A201B20634）均购自杭州联科生物技术股
          表明，达原饮具有抗病毒、解热、抗炎等多种药理作用，                          份有限公司；小鼠胃动素（motilin，MTL）、胃泌素（gas‐
          可用于治疗呼吸道病毒感染导致的肺部损伤                   [3―5] 。      trin，GAS）ELISA 试 剂 盒（批 号 分 别 为 20220620、
             “肺与大肠相表里”是中医藏象学的经典理论之一。                         20220612）均购自上海酶联生物技术有限公司；苏木精-
          临床调查发现，呼吸道病毒在引发肺部损伤的同时，还                           伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色套装（批号 G1003）购
          会导致患者肠道菌群失衡，出现恶心、呕吐、腹痛、腹泻
                                                             自武汉赛维尔生物科技有限公司；4% 多聚甲醛通用性
                      [6]
          等胃肠道症状 。益生菌混合物能通过调节肠道菌群的
                                                             组织固定液、红细胞裂解液（批号分别为 22105339、
          组成来调控肺泡巨噬细胞分泌干扰素 β，从而有效防治                          22118166）均购自北京兰杰柯科技有限公司；藻红蛋白
                            [7]
          RSV 引起的肺部病变 。可见，肠道菌群的改变对呼吸
                                                             标记的抗小鼠 CD45R/B220 抗体、别藻青蛋白标记的抗
          道病毒感染的发生、发展和治疗起重要作用。
                                                                                     ®
                                                             小鼠 CD8a 抗体、Alexa Fluor  700 标记的抗小鼠 CD3 抗
              为了更好地贴合 RSV 流行时的气候条件，符合“寒
          湿疫”的中医证候表现，本研究拟采用“寒湿造模+RSV                         体、异硫氰酸荧光素标记的抗小鼠 CD4 抗体、7-氨基放
                                                             线 菌 素 D 活 性 检 测 染 料（批 号 分 别 为 B357370、
          感染”的方式建立 RSV 寒湿郁肺证小鼠模型，同时在前
                                                             B348049、B357069、B356714、B321733）均购自美国 Bio‐
          期药效学实验的基础上，通过 16S rDNA 技术探索达原
                                                             Legend公司。
          饮对模型小鼠肠道菌群的影响，从而阐明其潜在作用机
                                                             1.3 病毒毒株与细胞
          制，为中医药治疗RSV感染提供实验依据。
                                                                 RSV病毒液由山东省医学科学院基础医学研究所提
          1 材料
                                                             供，于山东中医药大学BSL-2实验室传代，置于－80 ℃冰
          1.1 主要仪器
                                                             箱保存，备用。人喉癌细胞HEP-2由山东省医学科学院
              本研究所用主要仪器包括TC20TM型细胞计数仪、
                                                             基础医学研究所提供。
          XJ-023型酶标仪（美国Bio-Rad公司），FACSAria Ⅲ型流
                                                             1.4 实验动物
          式细胞仪（美国 BD 公司），X-30R 型全能高速冷冻离心
                                                                 SPF级雌性BALB/c小鼠36只，体重13～15 g，购自
          机（美国Allegra公司），A200型基因扩增仪（杭州朗基科
                                                             北京维通利华实验动物技术有限公司，实验动物生产许
          学仪器有限公司），EPS300型电泳仪、Tanon-2500型凝胶
                                                             可证号为 SCXK（京）2021-0006。所有小鼠均饲养于山
          成像仪（上海天能生命科学有限公司），NovaSeq 6000系
                                                             东中医药大学动物实验中心ABSL-2实验室。本实验遵
          统测序仪（美国Illumina公司），2100型生物分析仪（美国
          Agilent公司）等。                                       循 3R 原则动物福利，实验方案按山东中医药大学实验
          1.2 主要药品与试剂                                        动物福利伦理审查委员会相关规定执行并获批准（批件
              槟榔、厚朴、草果、知母、白芍、黄芩、甘草饮片均购                       号SDUTCM20230510001）。
          自山东建联盛嘉中药有限公司，经山东省中医药研究院                           2 方法
          周倩研究员鉴定，分别为棕榈科植物槟榔Areca catechu                    2.1 达原饮制备
          L. 的干燥成熟种子，木兰科植物厚朴 Magnolia officina‐                  取达原饮经方组成中槟榔、厚朴、草果、知母、白芍、
          lis Rehd. et Eils.的干燥干皮、根皮及枝皮，姜科植物草果               黄芩、甘草7味中药饮片，加10倍量水浸泡30 min后，煎
          Amomum tsaoko Crevost et Lemaire 的干燥成熟果实，百         煮1 h，过滤；再加8倍量水煎煮45 min，过滤；合并2次滤
          合科植物知母 Anemarrhena asphodeloides Bge. 的干燥          液，浓缩至1 g/mL（按生药总量计），于4 ℃保存，备用。


          中国药房  2023年第34卷第24期                                              China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 24    · 3001 ·
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