Page 47 - 《中国药房》2023年22期

流速为 1.0 mL/min；柱温为 30 ℃；检测波长为 363 nm； 品溶液色谱图（同法进样所得，具体见图2），指认了其中
进样量为10 μL。 5个，分别为绿原酸（峰1）、牡荆素葡萄糖苷（峰3）、牡荆
2.2 溶液的制备 素鼠李糖苷（峰 4）、金丝桃苷（峰 7）、异槲皮素（峰 8）。
2.2.1 混合对照品溶液 利用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012 版）》进
取绿原酸、牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、金丝 行相似度评价，结果（表1）显示，78批样品指纹图谱与对
桃苷、异槲皮素对照品各适量，精密称定，用甲醇溶解并 照指纹图谱的相似度为0.871～0.998。
定容，制成质量浓度分别为 1.02、1.02、1.07、1.04、0.41 1 4 7
420 2 3 8
mg/mL 的单一对照品储备液。分别取上述单一对照品 400 5 6 R
380 S78
储备液适量，置于10 mL容量瓶中，以50%甲醇稀释，制 360
340
320
成每 1 mL 含绿原酸 75.33 μg、牡荆素葡萄糖苷 80.18 300
280
260
μg、牡荆素鼠李糖苷115.77 μg、金丝桃苷35.26 μg、异槲 240
220
皮素12.40 μg的混合对照品溶液，摇匀，即得。 U/mV 200
180
160
2.2.2 供试品溶液 140
120
取山楂叶药材，粉碎，取粉末（过 80 目筛）约 1.0 g， 100
80
60
精密称定，置于具塞三角瓶中，精密加入 60% 甲醇 50 40
20
mL，称重，超声（频率40 kHz，功率700 W，下同）提取30 0 S1
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52
min，放至室温后再次称重，用60%甲醇补足失重，静置，
t/min
以 12 000 r/min 离心 10 min，取上清液，经 0.45 μm 微孔 图1 78批山楂叶药材的HPLC叠加指纹图谱和对照指
滤膜滤过，取续滤液，即得。 纹图谱（R）
2.3 指纹图谱分析
4
68
2.3.1 方法学考察 64
60
（1）精密度试验：取山楂叶供试品溶液（编号 S43）， 56
52
48 3
按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，记录色谱图。以峰 44
40
4（保留时间适中且峰面积较大，下同）为参照峰，计算得 U/mV 36 1 7
32
28
各共有峰相对峰面积的 RSD 均小于 1.9%，各共有峰相 24
20
16
对保留时间的 RSD 均小于 0.2%（n＝6），表明方法精密 12 8
8
度良好。 4 0
－4
（2）重复性试验：取山楂叶药材（编号S43），粉碎，取 －8
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52
粉末 6 份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按 t/min
“2.1”项下色谱条件进样分析，记录色谱图。以峰4为参 1：绿原酸；3：牡荆素葡萄糖苷；4：牡荆素鼠李糖苷；7：金丝桃苷；
8：异槲皮素。
照峰，计算得各共有峰相对峰面积的RSD均小于1.6%，
图2 混合对照品溶液的HPLC图
各共有峰相对保留时间的 RSD 均小于 0.2%（n＝6），表
明方法重复性良好。 2.3.3 指纹图谱的化学模式识别分析
（3）稳定性试验：取山楂叶供试品溶液（编号 S43）， （1）GCA：以 78 批山楂叶药材的 8 个共有峰峰面积
分别于室温下放置0、2、4、8、12、24 h时按“2.1”项下色谱 （采用均值法进行归一化处理）为评价指标并构建单元
条件进样分析，记录色谱图。以峰4为参照峰，计算得各 序列，选择最优参考序列和最差参考序列（其中最优、最
共有峰相对峰面积的 RSD 均小于 1.9%，各共有峰相对 差参考序列分别是所有样品的最大、最小值），计算各评
保留时间的 RSD 均小于 0.2%（n＝6），表明供试品溶液 价单元相对于最优、最差参考序列的相对最优、最差关
在室温下放置24 h内稳定性良好。 联度及相对关联度，并对相对关联度进行排序，其中相
[11]
2.3.2 指纹图谱建立、共有峰指认和相似度评价 对关联度大的样品质量较优 。结果（表 1）显示，不同
取78批山楂叶药材样品，粉碎，取粉末，按“2.2.2”项 产地山楂叶药材的相对关联度为 0.382～0.645，排前 3
下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样分 位的 S3、S7、S77 样品均产自河北省承德市。78 批样品
析，记录色谱图。将图谱结果以“AIA”格式导出，利用 中，河北省承德市、辽宁省葫芦岛市、山西省运城市、山
《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012 版）》，以 S1 东省临沂市样品的平均相对关联度分别为0.538、0.528、
样品图谱为参照，设定时间窗宽度为 0.2 min，以中位数 0.462、0.435。由此可知，河北省承德市样品的质量整体
法结合多点校正，生成叠加指纹图谱和对照指纹图谱 较优，其次为辽宁省葫芦岛市、山西省运城市、山东省临
（R），具体见图 1。共标定共有峰 8 个，经对比混合对照 沂市样品。

中国药房 2023年第34卷第22期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 22 · 2729 ·