Page 60 - 《中国药房》2023年20期
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（1）mRNA 水平检测：提取 MBD/BDD 组和 PSD 组                 3 结果
          大鼠脑组织总 RNA，进行 qPCR 分析。反应体系包括                        3.1 网络药理学分析结果
          cDNA 模板 1 μL，SYBR Green Master Mix 5 μL，上、下         3.1.1 靶点筛选结果
          游引物（具体序列及产物长度见表 1）各 0.4 μL，加无                           共筛选得 MBD/BDD 活性化合物 132 种，潜在靶基
          RNase 水至 10 μL。反应条件为 95 ℃预变性 2 min；                 因493个；共筛选得抑郁症相关靶基因1 333个。将活性
          95 ℃变性10 s，60 ℃退火/延伸30 s，共40个循环。以甘                  化合物潜在靶基因和抑郁症相关靶基因进行交叉，最终
          油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）为内参，采用2              －ΔΔCt 法检测     获得MBD/BDD抗抑郁相关靶基因131个。
          各目的基因的相对表达量。                                            组分-靶点网络（图 1A）展示了相关性较强的前 20
                 表1 目的基因的引物序列和产物长度                            个化合物与其潜在靶点的关系，这些成分在 MBD/BDD
           基因名称               序列（5′→3′）          产物长度/bp      抗抑郁中发挥了重要作用。所构建的 PPI 网络（图 1B）
           GAPDH        上游：TGTGAACGGATTTGGCCGTA    183
                        下游：ACCAGCTTCCCATTCTCAGC               中，有节点（即存在相互作用的蛋白）124 个和边 1 024
           BDNF         上游：CAGGTTCGAGAGGTCTGACG    122        条，节点度值由大到小排序的前9个蛋白对应基因依次
                        下游：CAAGTCCGCGTCCTTATGGT               是 IL1B、AKT1、INS、ESR1、CASP3、GAPDH、IL6、
           TrkB         上游：ACCAAACCAATCGGGAGCAT    107
                        下游：ATGTCTCGCCAACTTGAGCA               CREB1、TNF，表明这些基因参与了MBD/BDD抗抑郁作
           Fezf2        上游：CCACTTACCCACCATCGGAG    108        用的发挥。
                        下游：CCAGCAGAAAAAGCTTGGGG               3.1.2 KEGG通路富集结果
           Arx          上游：GGCCCGAGTGCAAGAGTAAA     86
                        下游：CATTTTGCACGGGCTTCTCC                   131 个相关靶基因主要富集于神经活性配体-受体
           Ostn         上游：CCACCCACAACCAGAGAAGA    142        相互作用、环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate，
                        下游：TGTCAAGGGGAGACCCGAAG               cAMP）、尼古丁成瘾、逆行内源性大麻素信号转导、缺氧
           Nrgn         上游：CTGCTCCAAGCCAGACGAC     101
                        下游：CCATGTGGCCCCGAAAACT                诱导因子 1（hypoxia-inducible factor-1，HIF-1）等信号通
             （2）蛋白水平检测：提取 PSD 组、FLX 组和 MBD/                   路。上述信号通路分别富集到靶基因 21、20、14、14、14
          BDD 组大鼠脑组织总蛋白，经浓度测定和变性处理后，                          个，可能是MBD/BDD发挥抗抑郁作用的关键途径。
          进行电泳分离并转膜、封闭，随后加入 BDNF、TrkB、                        3.2 动物实验结果
          β-actin 一抗（稀释比例均为 1∶1 000），4 ℃孵育过夜；洗                3.2.1 行为学测试结果
          膜后，加入相应二抗（稀释度1∶1 000），室温孵育1 h，用                         OFT 结果显示，与空白对照组比较，PSD 模型组大
          ECL 显色后成像，以目的蛋白与内参蛋白（β-actin）的灰                     鼠在中心方格花费的总时间及其行进的总距离均显著
          度值比值表示目的蛋白的相对表达量。                                   缩短或减少（P＜0.05）；与PSD模型组比较，各药物组大
          2.3 统计学方法                                           鼠上述指标均显著延长或增加（P＜0.05）。FST 结果显
              采用GraphPad Prism v9软件对数据进行统计分析。                 示，与空白对照组比较，PSD 模型组大鼠的累计不动时
          数据以 x±s 表示，多组间比较采用单向或双向方差分                          间显著延长（P＜0.05）；与PSD模型组比较，各药物组大
          析 ，进 一 步 两 两 比 较 采 用 LSD-t 检 验 。 检 验 水 准            鼠 的 累 计 不 动 时 间 均 显 著 缩 短（P＜0.05）。 结 果
          α＝0.05。                                             见图2。






















                                  A.组分-靶点网络                                           B. PPI网络
             黄色椭圆：主要活性成分；蓝色方块：靶基因；蓝色圆形：靶基因对应蛋白。
                                         图1 MBD/BDD抗抑郁相关靶点筛选结果


          · 2486 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 20                            中国药房  2023年第34卷第20期
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