Page 71 - 《中国药房》2023年16期

2、1、0.5 μg/mL，吡仑帕奈质量浓度依次为1 500、1 200、 2.5.1 专属性试验
750、375、150、60、30、15 ng/mL 的混合标准溶液。参照 取 6 份不同来源的健康受试者空白血浆，以等体积

上述方法，配制拉考沙胺质量浓度分别为 1.5、10、37.5 乙腈代替内标工作液，其余按“2.4”项下方法处理，再按
μg/mL，吡仑帕奈质量浓度分别为 45、300、1 125 ng/mL “2.1”“2.2”项下条件进样分析。取健康受试者空白血浆
的低、中、高质量浓度质控溶液。 40 μL 至 1.5 mL 离心管中，加入内标工作液 20 μL 和拉
精密称取内标对照品 15.1 mg，用甲醇溶解并定容 考沙胺、吡仑帕奈混合标准溶液（质量浓度分别为 0.5
于10 mL容量瓶中，得质量浓度为1.51 mg/mL的内标储 μg/mL、15 ng/mL）40 μL，以乙腈700 μL沉淀蛋白后，其
余按“2.4”项下方法处理，再按“2.1”“2.2”项下条件进样
备液，于－80 ℃下保存。取上述内标储备液适量，用甲
分析。取患者（编号1、6）血浆样品，按“2.4”项下方法处
醇稀释，得质量浓度为10 μg/mL的内标工作液。
理，再按“2.1”“2.2”项下条件进样分析。结果（图 1）显
2.4 患者血浆样品的采集及前处理
示，拉考沙胺、吡仑帕奈和内标的保留时间分别约为
待患者体内血药浓度达稳态后，于下次给药前 30
1.8、2.4、2.2 min，其色谱峰峰形和分离度均良好，血浆中
min 抽取其静脉血 1～2 mL，置于乙二胺四乙酸抗凝采
的内源性物质对各待测成分的检测均无干扰。
血管中，于 4 ℃下以 2 000 r/min 离心 10 min，取上层血
2.5.2 标准曲线绘制与定量下限考察
浆，即得待测血浆样品。取上述待测血浆样品40 μL，置
取健康受试者空白血浆40 μL至1.5 mL离心管中，
于1.5 mL离心管中，加入内标工作液20 μL，以乙腈740
加入内标工作液20 μL和“2.3”项下拉考沙胺、吡仑帕奈
μL 沉淀蛋白，涡旋混匀 1 min，于 4 ℃下以 12 000 r/min
不同质量浓度的混合标准溶液40 μL，以乙腈700 μL沉
离心 10 min；取上清液 50 μL 至另一 1.5 mL 离心管中， 淀蛋白后，其余按“2.4”项下方法处理，再按“2.1”“2.2”项
加入乙腈-水（20∶80，V/V）950 μL稀释，涡旋混匀后进样 下条件进样分析，记录峰面积。分别以拉考沙胺、吡仑
分析。 帕奈与内标的峰面积比值为纵坐标（y1、y2），上述待测
2.5 分析方法的验证 成分的质量浓度为横坐标（x1、x2），采用加权最小二乘

依据2020年版《中国药典》（四部）“生物样品定量分 法（ω＝1/x）进行线性回归，得回归方程分别为 y1＝
2
析方法验证指导原则”进行方法学验证 。 0.319 77x1+0.043 52（r＝0.996 9）、y2＝0.001 17x2+0.002 19
[7]
3.5×10 4 m/z 251.2→144.1 6 000 m/z 350.2→219.2 3.0×10 5 m/z 327.2→270.0
3.0×10 4 5 000
2.5×10 4 4 000 2.0×10 5
intensity 2.0×10 4 4 intensity 3 000 intensity
1.5×10
1.0×10 4 2 000 1.0×10 5
5 000 1 000
0 0 0
0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5
t/min t/min t/min
A.空白血浆
3.5×10 4 m/z 251.2→144.1 6 000 m/z 350.2→219.2 3.0×10 5 m/z 327.2→270.0
3.0×10 4 5 000 吡仑帕奈
拉考沙胺 内标
2.5×10 4 4 000 2.0×10 5
intensity 2.0×10 4 4 intensity 3 000 intensity
1.5×10
1.0×10 4 2 000 1.0×10 5
5 000 1 000
0 0 0
0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5
t/min t/min t/min
B.空白血浆+混合标准溶液
1.2×10 6 m/z 251.2→144.1 1.2×10 5 m/z 350.2→219.2 3.0×10 5 m/z 327.2→270.0
1.0×10 6 拉考沙胺 1.0×10 5 吡仑帕奈
内标
8.0×10 5 8.0×10 4 2.0×10 5
intensity 6.0×10 5 intensity 6.0×10 4 intensity
4.0×10 5 4.0×10 4 1.0×10 5
2.0×10 5 2.0×10 4
0 0 0
0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5
t/min t/min t/min
C.患者血浆样品
图1 空白血浆、空白血浆+混合标准溶液和患者血浆样品的典型色谱图

中国药房 2023年第34卷第16期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 16 · 1981 ·