Page 55 - 《中国药房》2023年16期
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液。糖尿病模型成功建立后，立即用1%戊巴比妥钠（40 色，再经梯度乙醇脱水和二甲苯透明后，以中性树脂封
mg/kg）麻醉对照组大鼠和糖尿病模型大鼠，剃除背毛并 片，使用显微镜观察各组大鼠创面肉芽组织中细胞和血
消毒，在腰椎正中偏上位置标记直径约 2 cm 的圆形区 管的变化。
域，于无菌条件下剪去该标记区域的皮肤及皮下组织 2.6 大鼠创面肉芽组织中SRC/MEK/ERK信号通路相
（深至筋膜层），伤口用无菌纱布包裹。若糖尿病模型大 关蛋白表达检测
鼠伤口出现感染且溃疡最大直径达1.8 cm，表明糖尿病 采用 Western blot 法进行检测。收集每组另 5 只大
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性皮肤溃疡大鼠模型建立成功 。 鼠的创面肉芽组织，于－80 ℃下保存。取上述冻存的创
2.2 大鼠分组与给药 面肉芽组织，加入裂解液以提取总蛋白，用BCA法测定
将建模成功的糖尿病性皮肤溃疡模型大鼠随机分为 蛋白浓度后进行变性处理，然后电泳、转膜、封闭，加入
模型组、PTE低剂量组、PTE高剂量组、PTE高剂量+PP2 SRC、p-SRC、MEK1/2、p-MEK1/2、ERK1/2、p-ERK1/2、
组，每组10只。建模结束后的第2天，PTE低、高剂量组 GAPDH 一抗（稀释比例分别为 1∶10 000、1∶5 000、1∶
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大鼠分别腹腔注射 40、80 mg/kg 的 PTE ；PTE 高剂量+ 20 000、1∶500、1∶10 000、1∶1 000、1∶2 500），4 ℃孵育过
PP2 组大鼠先腹腔注射 80 mg/kg 的 PTE 后，再腹腔注射 夜；加入相应二抗（稀释比例为 1∶500），室温孵育 2 h；
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2 mg/kg的PP2 ；对照组和模型组大鼠腹腔注射生理盐 ECL 显色后，置于凝胶成像仪下成像。以 GAPDH 为内
水，每天1次，连续14 d。 参，使用Image J软件分析目的蛋白的表达水平，再以磷
2.3 大鼠创面愈合率测算 酸化蛋白与非磷酸化蛋白的表达水平比值表示目的蛋
分别在造模结束后第 1 天和给药第 7、14 天观察所 白的磷酸化水平。
有大鼠的创面愈合情况并拍照，使用 Image J 软件计算 2.7 统计学方法
创面面积并按下式计算给药第7、14天的创面愈合率：创 采用 GraphPad Prism 8.0 软件对数据进行统计分
面愈合率＝（造模结束后第1天的创面面积－给药后的 析。计量资料以x±s表示，多组间比较采用单因素方差
创面面积）/造模结束后第1天的创面面积×100%。 分析，进一步两两比较采用 SNK-q 检验。检验水准
2.4 大鼠血清中IL-1ββ、IL-6、TNF-αα、VEGF含量检测 α＝0.05。
给药第14天创面观察结束后，将所有大鼠用1%戊 3 结果
巴比妥钠麻醉，采集尾静脉血，于 4 ℃下以 2 000 r/min 3.1 各组大鼠的创面愈合率比较
离心 15 min，收集上清液，按照 ELISA 试剂盒说明书方 与对照组比较，模型组大鼠给药第7、14天的创面明
法操作，以酶标仪检测各组大鼠血清中 IL-1β、IL-6、 显扩大，其愈合率均显著降低（P＜0.05）；与模型组比
TNF-α、VEGF含量。 较，PTE 低、高剂量组大鼠给药第 7、14 天的创面均有所
2.5 大鼠创面肉芽组织病理变化观察 缩小，其愈合率均显著升高（P＜0.05）；与PTE高剂量组
采血结束后，将所有大鼠处死，收集每组5只大鼠的 比较，PTE 高剂量+PP2 组大鼠给药第 7、14 天的创面均
创面肉芽组织，于4%多聚甲醛中固定24 h后，制备石蜡 有所扩大，其愈合率均显著降低（P＜0.05）。结果见图1
切片。切片经二甲苯和梯度乙醇脱蜡水化后，用 HE 染 （造模结束后第1天的愈合情况图略）、表1。
给药第7天
给药第14天
A.对照组 B.模型组 C. PTE低剂量组 D. PTE高剂量组 E. PTE高剂量+PP2组
图1 各组大鼠皮肤创面的愈合情况
中国药房 2023年第34卷第16期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 16 · 1969 ·
