Page 40 - 《中国药房》2023年14期
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KEYWORDS     Huayu  xiaozhong  decoction；  deep  vein  thrombosis；  inflammatory  response；  silent  information  regulator  2/nuclear
          transcription factor kappa B signaling pathway


              深静脉血栓形成（deep vein thrombosis，DVT）是常            （interleukin-1β，IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子α（tumor ne‐
          见的静脉血栓栓塞性疾病之一，治愈率低，术后复发率                            crosis factor-α，TNF-α）酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂
          高。研究指出，DVT可涉及上肢和下肢，其中下肢DVT                          盒（批号分别为 20220204、20220215、20220217）均购自
          常导致肢体功能丧失和异常栓塞、肺栓塞发生，或进一                            上海广锐生物科技有限公司；大鼠组织因子（tissue fac‐
          步引发血栓后综合征 。目前，DVT的治疗以抗凝为主，                          tor，TF）免疫组化试剂盒（批号20220706）购自上海圻明
                            [1]
          然而临床实践显示，抗凝剂导致患者严重出血的风险较                            生物科技有限公司；兔源 SIRT2、磷酸化 NF-κB p65（p-
            [2]
          高 。既往研究表明，炎症在DVT的形成中具有重要作                           NF-κB p65）、NF-κB p65、乙酰化 NF-κB p65[NF-κB p65
            [3]
          用 。因此，开发抑制DVT过程中炎症反应的新型药物                          （acetyl K310）]、β-肌动蛋白（β-actin）抗体和辣根过氧化
          具有重要意义。                                             物酶标记的山羊抗兔 IgG 二抗（批号分别为 ab211033、
              化瘀消肿汤（Huayu xiaozhong decoction，HXD）为           ab239882、ab207297、ab19870、ab8226、ab6721）均购自英
          海南省中医院的传统院内方，可预防人工股骨头置换术                            国Abcam公司。
                                 [4]
          患者术后下肢DVT的发生 ，但具体机制尚未可知。相                           1.3 实验动物
          关研究显示，上调沉默信息调节因子1（silent information                    SPF 级雄性 SD 大鼠 96 只，6 周龄，体重为 210～220
          regulator-1，SIRT1）表达、抑制核因子 κB（nuclear tran‐         g，购自广东省医学实验动物中心，生产许可证号为
          scription factor kappa B，NF-κΒ）蛋白核转移均可改善            SCXK（粤）2022-0002。本研究方案经实验所在单位实
                            [5]
          DVT大鼠的炎症反应 ；同时，在血栓性卒中小鼠恢复期                          验动物伦理委员会审核通过，批件号为2022001203。
          间，其体内SIRT2表达水平明显升高 。考虑到SIRT2与                       2 方法
                                         [6]
          SIRT1 同 为 SIRT 家 族 成 员 ，而 HXD 能 否 通 过 调 控           2.1 分组与给药
          SIRT2/NF-κB 信号通路来改善 DVT 大鼠的炎症反应尚                        按照随机数字表法将SD大鼠分为对照组（CK组）、
          不明确，因此，本研究拟初步探讨HXD对DVT大鼠炎症                          模型组（Model组）、HXD低剂量组（HXD-L组）、HXD中
          反应的影响及潜在机制，以期为 DVT 的临床治疗提供                          剂量组（HXD-M 组）、HXD 高剂量组（HXD-H 组）、阳性
          参考。                                                 对照组（LMWHS组）、SIRT2抑制剂组（AK-7组）、HXD-
          1 材料                                                M联合AK-7组（HXD-M+AK-7组），每组12只。所有大
          1.1 主要仪器                                            鼠适应性喂养 1 周后，除 CK 组外，其余组大鼠均采用
              RAC-030 型全自动凝血分析仪购自上海玉研科学                       Reyers法构建DVT模型：大鼠以2%戊巴比妥钠麻醉，保
          仪器有限公司；E100 型光学显微镜购自日本 Nikon 公                      持仰卧位并于腹部正中间切口，游离左肾静脉与下腔静
          司；SPL-318C 型酶标仪购自昆明诺金科技有限公司；                        脉交会处，以 4-0 线结扎左肾静脉下面的下腔静脉，5-0
          DYCZ-24DH型双板垂直电泳仪购自北京六一生物科技                         线结扎此下腔静脉主要属支，缝合伤口4 h后，拆开腹部
          有限公司；XR 型凝胶成像分析系统购自美国 Bio-Rad                       缝线，若观察到股静脉管腔变粗、呈紫黑色且其中存在
                                                                                    [7]
          公司。                                                 深色物质即表明造模成功 。造模 24 h 后，各组大鼠进
          1.2 主要药品与试剂                                         行如下处理：HXD-L组、HXD-M组、HXD-H组大鼠分别
              HXD 由海南省中医院药剂科提供，全方含三七 15                       灌胃 HXD 10.86、21.71、32.57 mg/kg（以生药总量计） ，
                                                                                                           [8]
          g、桃仁 10 g、红花 10 g、川芎 10 g、赤芍 10 g、牛膝 15 g、          并同时腹腔注射等体积生理盐水；LMWHS 组、AK-7
          炮穿山甲15 g、茜草10 g、大黄5 g、当归15 g、杜仲15 g、                组 大 鼠 分 别 腹 腔 注 射 LMWHS  600  IU/kg 、AK-7  20
                                                                                                   [9]
                                                                   [10]
          茯苓15 g、乳香8 g、没药8 g、木瓜10 g、桂枝10 g[上述药                mg/kg ，并同时灌胃等体积生理盐水；HXD-M+AK-7组
          材用水500 mL煎煮并浓缩至200 mL，再加水300 mL煎                    大鼠灌胃 HXD 21.71 mg/kg（以生药总量计），并同时腹
          煮并浓缩至200 mL，过滤，收集滤液，即得（每1 mL药液                      腔注射AK-7 20 mg/kg；CK组、Model组大鼠均灌胃和腹
          相当于生药总量0.9 g）]，临用前用生理盐水稀释至所需                        腔注射等体积生理盐水，每天1次，持续2周。
          浓度。                                                 2.2 标本收集
              低分子量肝素钠（low molecular weight heparin so‐            末次给药24 h后，麻醉各组大鼠，腹腔取血，用于凝
          dium，LMWHS）注射液（阳性对照药物，批号 20220406，                  血功能指标和炎症因子的检测。采集血样后，处死各组
          规格 0.2 mL∶2 500 IU）购自齐鲁制药有限公司；AK-7                  大鼠，收集血栓形成处的下腔静脉组织（CK组大鼠取相
         （SIRT2抑制剂）对照品（批号20220811，纯度99.59%）购                  同位置的下腔静脉组织），其中一部分（含每组6只大鼠
          自江西江蓝纯生物试剂有限公司；大鼠白细胞介素 1β                           的下腔静脉组织）固定于 4% 多聚甲醛中，用于苏木精-


          · 1698 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 14                            中国药房  2023年第34卷第14期
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