Page 73 - 《中国药房》2023年9期

weakened （P＜0.01）. Proportion of cell cycle in G2 phase， apoptosis rate， protein and mRNA expression of Bax were increased
significantly （P＜0.01）； and all the above effects were in dose-dependent manner. CONCLUSIONS 3m can inhibit the
proliferation， clone formation， migration and invasion abilities of cutaneous squamous cell carcinoma A431 and Colo-16 cells in a
dose-dependent manner， the mechanism of which may be associated with inhibiting the activity of JAK2/STAT3 signaling pathway，
and inducing cell apoptosis.
KEYWORDS cutaneous squamous cell carcinoma； dihydrochromone； polycyclic pyrrole-spiroepoxidole； proliferation；
apoptosis； migration； invasion

皮 肤 鳞 状 细 胞 癌（cutaneous squamous cell carci‐ Biotech公司），Step one plus型实时荧光定量PCR仪（美
noma，cSCC）的发病率仅次于基底细胞癌，且随着人们 国 Applied Biosystems 公司），FACS VERSE 型流式细胞
生活环境的变化其发病率持续上升 [1―2] 。尽管 cSCC 属 仪（美国 BD 公司），DYCP-31DN 型蛋白电泳仪、DYCZ-
于惰性肿瘤，但如果病情未得到控制其仍然可以局部浸 40D型蛋白转膜仪（北京六一仪器有限公司）等。
润并远处转移，此类患者的 10 年生存率低于 20% [3―5] 。 1.2 主要药品与试剂
手术是 cSCC 最常用的治疗方式，但对于局部晚期及转 3m（批号20190821）购自上海美迪西生物医药股份
移性 cSCC 来说，患者仍面临术后高复发率和高病死率 有限公司；5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU）、细胞培养
的问题，其他药物治疗方式也存在疗效差、副作用大等 级二甲基亚砜（DMSO）、蛋白酶抑制剂、高效 RIPA 细
[6]
局限 。因此，寻找治疗 cSCC 的新型药物具有重要 胞 裂解液、BCA 蛋白浓度测定试剂盒（批号分别为
意义。 1209G024、401P32、20210616、20210719、20210703）均购
天然产物因其毒性低、分子量小、抗肿瘤活性强等 自北京索莱宝科技有限公司；胎牛血清（批号 1742862）
被广泛应用于临床肿瘤防治 。二氢色原酮普遍存在于 购自以色列 BI 公司；DMEM 高糖培养基、青链霉素（批
[7]
灰叶素、杜英碱等天然产物中，吡咯螺环氧化吲哚普遍 号分别为 8122265、2321148）均购自美国 Gibco 公司；
存在于钩藤碱C、鸭脚木碱等天然产物中，两者均具有明 CCK-8 检测试剂（批号 JU739）购自日本同仁化学研究
显的抗肿瘤、抗病毒、抗氧化自由基等活性 [8―9] 。3m是由 所；Matrigel 基质胶（批号 0323001）购自美国 BD 公司；
含C—F键官能团的二氢色原酮拼接多环吡咯螺环氧化 细胞周期检测试剂盒、Annexin Ⅴ-FITC 细胞凋亡检测
吲哚构成的化合物（结构式见图1），其对人白血病细胞、 试剂盒、ECL 发光液（批号分别为 MA0334、Jan-18G、
[10]
前列腺癌细胞具有较好的抑制作用 ，但其是否具有抗 MA0186-1）均购自大连博格林生物科技有限公司；兔源
cSCC 作用笔者查阅文献尚未见报道。基于此，本研究 JAK2、STAT3、磷酸化JAK2（p-JAK2）、磷酸化STAT3（p-
以人 cSCC 的 A431、Colo-16 细胞为研究对象，并基于 STAT3）、B 细胞淋巴瘤 2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）、
Janus激酶2/信号转导及转录激活因子3（Janus kinase 2/ Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X protein，Bax）、β-ac‐
signal transduction and activator of transcription 3，JAK2/ tin 单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔免
STAT3）信号通路初步探讨 3m 抗 cSCC 的作用及机制， 疫球蛋白 G 二抗（批号分别为 2212188、M03023207、
以期为cSCC的药物治疗提供参考。 M12212997、1252412、4071637、4121556、0094497、
08A121）均购自沈阳万类生物科技有限公司；Trizol试剂
盒、逆转录 PCR（RT-PCR）试剂盒（批号分别为 9108、
RR037A）均购自宝日医生物技术（北京）有限公司。
1.3 细胞
人 cSCC 的 A431、Colo-16 细胞购自上海富衡生物
科技有限公司。
2 方法
2.1 细胞培养
采用含10%胎牛血清、1%青链霉素的DMEM高糖
培养基于 37 ℃、5%CO2的恒温细胞培养箱中常规培养
图1 3m的化学结构式
A431、Colo-16细胞。每2天更换1次细胞培养液。
1 材料 2.2 A431、Colo-16细胞增殖活力的检测
1.1 主要仪器 采用 CCK-8 法进行检测。取对数生长期的 A431、
本研究所用主要仪器有 MCO-18AIC 型电动恒温 Colo-16 细胞制成 6×10 个/mL 的单细胞混悬液，以 100
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CO2培养箱（日本Sanyo公司）、IX51型倒置显微镜（日本 μL/孔接种于 96 孔板中，培养 24 h 贴壁后，分为对照组
Olympus 公司），SYNERGY-H4 型多功能酶标仪（美国 （含 0.1%DMSO 培养基）、5-FU 不同浓度组（5、10、20、

中国药房 2023年第34卷第9期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 9 · 1087 ·