Page 85 - 《中国药房》2023年6期
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more obvious， and the efficacy of SABA treatment on children with TT type is better at locus rs2895795.
          KEYWORDS    acute  asthma  attack；  ADRB2；  gene  regulatory  region  polymorphism；  short-acting  beta  2  receptor  agonists；
          efficacy； children


                                                  [1]
              支气管哮喘是儿童较常见的慢性疾病之一 。尽管                         因组DNA提取试剂盒（离心柱型）[天根生化科技（北京）
          儿童哮喘的日常管理取得了巨大进步，但在气道炎症和                           有限公司]提取DNA。以连锁不平衡系数≥0.8为标准，
                                                       [2]
          环境刺激的双重作用下，患儿仍存在急性发作的可能 。                          在NCBI HapMap数据库（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/）
          短效 β2受体激动剂（short-acting beta 2 receptor agonist，   中 查 询 并 下 载 ADRB2 基 因 rs2895795、rs11168070、
          SABA）是治疗支气管哮喘急性发作的一线药物，主要包                         rs12654778位点的SNPs信息，采用Primer 3软件设计得
          括沙丁胺醇和特布他林。研究指出，SABA可选择性地                          rs2895795 位 点 上 游 引 物 5′-GCCAGGATCTTTTGCT-
          结合细胞表面的β2肾上腺素能受体（β2 adrenergic recep‐              TTCTATAGCTT-3′和 下 游 引 物 5′-AATCCTTTCATC-
          tor，β2AR），通过G蛋白偶联传递信息，激活腺苷酸环化                      TGCTGGATAGTTTGT-3′，rs11168070 位 点 上 游 引 物
          酶，从而将三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）转            5′-GCCACAGAAGAGCCAAAAGCTC-3′和 下 游引物
          变成 3，5-环磷酸腺苷（3，5-cyclic adenosine monophos‐        5′-ACCACTGCTTCCCGGCTACC-3′，rs12654778 位点上
          phate，cAMP），进而使平滑肌细胞内 cAMP 含量增高；                   游引物 5′-GTTTGTTTCTGGCCGCGTTTCT-3′和下游
          cAMP 作为第二信使，可激活蛋白磷酸酶，使底物磷酸                         引物 5′-CCCCACATTCGGAAGGAAACG-3′。引物由
          化，并使细胞内游离钙减少，从而舒张气道平滑肌，改善                          生工生物工程（上海）股份有限公司合成。随后，对所得
          哮喘患儿的气道狭窄并降低其呼吸道阻力                   [3―4] 。SABA
                                                             DNA 进行聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，
          的有效性已得到证实，然而仍有很多接受该药治疗的哮
                                                             PCR）扩增。PCR 反应体系（总体积 20 μL）包括 10×
          喘患儿的症状无法得到有效缓解。研究发现，SABA治                                                               2+
                                                             PCR 反 应 缓 冲 液 14  μL、3.0  mmol/L  Mg   1  μL、0.3
          疗支气管哮喘的疗效存在较大的个体差异，且与药物作
                                                             mmol/L dNTP 混合液 1 μL、Taq 酶 1 μL、DNA 模板 1
          用通路和支气管哮喘发病通路相关基因的突变有
                                                             μL、多重PCR引物2 μL。PCR扩增条件为95 ℃预变性
          关 [5―6] ，提示支气管哮喘相关易感基因的多态性可能会
                                                             2 min；94 ℃变性20 s，65 ℃退火40 s，72 ℃延伸15 min，
          影响SABA的疗效。
                                                             共35个循环。PCR产物经纯化后，由上海天昊生物科技
              β2AR 的编码基因 ADRB2 位于人染色体 5q31-q32，
                                [7]
          与支气管哮喘易感性相关 。有研究指出，ADRB2 基因                        有限公司完成测序、分型。
          编 码 区 单 核 苷 酸 多 态 性（single  nucleotide  polymor‐   1.3 治疗方法
                                                                 根据《儿童支气管哮喘诊断与防治指南（2016 年
          phisms，SNPs）对接受 SABA 治疗者的支气管扩张反应                       [10]
                [8]
          有影响 ，但尚未有研究探讨 ADRB2 基因调控区 SNPs                     版）》 ，所有患儿均接受常规治疗，包括解痉平喘、化痰
                                                             止咳、氧疗及抗感染等。具体治疗方案包括：吸入用硫
          与SABA疗效的相关性。本课题组前期相关研究证实，
                                                             酸沙丁胺醇溶液[GlaxoSmithKline Australia Pty Ltd.，国
          ADRB2 基 因 调 控 区 的 rs2895795、rs11168070、
                                              [9]
          rs12654778多态性位点与哮喘易感性相关 。本研究拟                      药准字HJ20160060，规格2.5 mL∶5 mg（以沙丁胺醇计）]
                                                             每次 2.5 mg（体质量≤20 kg）或 5 mg（体质量＞20 kg），
          进一步验证ADRB2基因调控区SNPs与SABA疗效的相
          关性，旨在为哮喘药物疗效预测和个体化精准医疗提供                           或硫酸特布他林雾化吸入用溶液（瑞典 AstraZeneca AB
          参考。                                                公司，注册证号 H20140108，规格 2 mL∶5 mg）每次 2.5
          1 资料与方法                                            mg（体质量≤20 kg）或 5 mg（体质量＞20 kg），雾化吸
          1.1 研究对象                                           入，每天2次；在上述基础上，加用吸入用布地奈德混悬
              本研究选取 2016 年 10 月－2020 年 10 月就诊于中              液（ 澳 大 利 亚 AstraZeneca  Pty  Ltd.，注 册 证 号
          国人民解放军北部战区总医院的支气管哮喘患儿为研                            H20140475，规格2 mL∶1 mg）1 mg，雾化吸入，每天2次。
          究对象，纳入标准包括：（1）符合《儿童支气管哮喘诊断                         所有患儿均连续治疗7 d。
                                          [10]
          与防治指南（2016 年版）》的诊断标准 ；（2）轻、中度哮                     1.4 肺功能指标检测方法
          喘急性发作；（3）东北地区汉族儿童。排除标准包括：                              于治疗前及治疗 7 d 时，采用 Master Screen 型肺功
         （1）合并心、肝、肾等重要器官疾病者；（2）未完成肺功能                        能仪（德国Jaeger公司）对纳入哮喘患儿的肺功能指标进
          检测者；（3）对研究药品过敏者。本研究方案经该院伦                          行检测，主要包括：第1秒用力呼气容积占预计值百分比
          理委员会审核批准[批件号为伦审Y（2020）054号]。                      （forced  expiratory  volume  in  the  first  second  in  percent
          1.2 基因型检测方法                                        predicted  value，FEV1%pred）、第 1 秒 用 力 呼 气 容 积
              抽取哮喘患儿外周静脉血2 mL至乙二胺四乙酸抗                       （forced expiratory volume in the first second）/用力肺活
          凝管中，于－80 ℃保存，待检。采用血液/细胞/组织基                        量（forced vital capacity）[简称一秒率（FEV1/FVC%）]、最


          中国药房  2023年第34卷第6期                                                 China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 6    · 715 ·
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