Page 61 - 《中国药房》2023年6期

2.5 大鼠肠道菌群测序 3.2 火麻仁油对 UC 模型大鼠血清中 TNF-α、IL-6、IL-
末次给药后，对照组、模型组、火麻仁油组大鼠分别 10含量的影响
随机收集粪便5份，置于无菌离心管中，迅速冻存于液氮 与对照组比较，模型组大鼠血清中 TNF-α、IL-6 含
中，再转存于－80 ℃冰箱中，备用。采用基因组DNA提 量均显著增加，IL-10含量显著降低（P＜0.05）；与模型组
取试剂盒提取粪便样本中的微生物基因组DNA，严格按 比较，火麻仁油组和柳氮磺胺吡啶组大鼠血清中 TNF-
照试剂盒说明书操作。以上述DNA为模板，对细菌16S α、IL-6 含量均显著降低，IL-10 含量均显著增加（P＜
rRNA 基因双高变 V3～V4 区[特异性引物为 338F（5′- 0.05）。结果见表3。
ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′）和806R（5′-GGACT- 表3 火麻仁油对UC模型大鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-
ACHVGGGTWTCTAAT-3′）]进行 PCR 扩增。所得 PCR 10含量的影响（x±s，n＝10，pg/mL）
扩增产物经纯化、定量和均一化处理后进行高通量测 组别 TNF-α IL-6 IL-10
对照组 96.75±10.56 34.16±9.97 168.42±23.05
序。首先，使用 QIIME 软件对测序序列进行聚类分析， 模型组 132.04±11.46 a 68.34±8.17 a 67.22±16.48 a
获得操作分类单元（operational taxonomic units，OTUs）； 火麻仁油组 102.30±12.07 b 51.05±11.52 b 75.59±16.80 b
对所获OTUs进行分类学注释并生成不同分类水平下的 柳氮磺胺吡啶组 99.67±12.53 b 42.23±10.57 b 105.97±18.29 b
物种丰度。其次，利用Mothur软件计算样品的Alpha多 a：与对照组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05
样性指数（ACE 指数、Chao1 指数、Shannon 指数、Simp‐ 3.3 火麻仁油对 UC 模型大鼠结肠组织病理变化的
son指数）分析单个样品内部的物种多样性；绘制稀释性 影响
对照组大鼠结肠组织上皮层完整，杯状细胞丰富，
曲线和Shannon指数曲线，分析样品测序结果质量；基于
肠腺排列整齐且结构清晰。模型组大鼠结肠组织上皮
weighted UniFrac算法中的主坐标分析（principal coordi‐
层发生脱落，边缘散乱，隐窝不清晰，黏膜层有水肿，炎
nates analysis，PCoA）比较不同样品在物种多样性方面
症细胞浸润且入侵黏膜下层，肠腺紊乱。火麻仁油组和
的相似程度，即 Beta 多样性。最后，通过线性判别分析
柳氮磺胺吡啶组大鼠结肠组织上皮层较完整，可见少量
效应大小[linear discriminant analysis（LDA） effect size，
炎症细胞浸润，杯状细胞增加，肠腺排列较整齐。结果
LEfSe]分析并寻找差异菌群[以LDA score（log10）＞2为
见图1。
标准 。
[5]
2.6 统计学方法
采用SPSS 20.0软件对数据进行统计分析。多组间
比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用 Tukey 检
验。检验水准α＝0.05。
3 结果
3.1 火麻仁油对 UC 模型大鼠体质量、DAI 评分、结肠 A.对照组 B.模型组
长度、结肠质量及结肠单位长度质量的影响
与对照组比较，模型组大鼠的体质量显著下降，DAI
评分显著升高，结肠长度显著缩短，结肠质量和结肠单
位长度质量均显著增加（P＜0.05）；且该组大鼠隐血测
试为阳性，部分大鼠可见便血。与模型组比较，火麻仁
油组和柳氮磺胺吡啶组大鼠的上述指标均显著逆转
C.火麻仁油组 D.柳氮磺胺吡啶组
（P＜0.05），大鼠隐血测试虽为阳性，但没有出现便血的
图1 火麻仁油对UC模型大鼠结肠组织病理变化的影响
情况。结果见表2。
3.4 火麻仁油对UC模型大鼠肠道菌群的影响
表2 火麻仁油对 UC 模型大鼠体质量、DAI 评分、结
肠长度、结肠质量及结肠单位长度质量的影响 3.4.1 样品测序结果质量分析 本实验 15 个样品测序
共获得 1 199 355 对 reads，经过双端 reads 拼接、质控过
（x±s，n＝10）
滤和去除嵌合体后，共产生 1 126 576 条有效序列，平均
结肠单位长度质量/
组别 体质量/g DAI评分 结肠长度/cm 结肠质量/g
（g/cm） 每个样品产生 75 105 条有效序列。在 97% 的相似度水
对照组 257.48±9.16 0.12±0.01 23.21±0.78 1.45±0.09 0.062 5±0.006 2 平下对序列进行聚类，共获得 834 个 OTUs。稀释性曲
模型组 186.03±8.21 a 1.43±0.21 a 17.88±0.93 a 1.71±0.12 a 0.095 3±0.004 3 a 线和 Shannon 指数曲线均随测序量的增加而趋于平缓，
火麻仁油组 213.45±6.03 b 0.61±0.03 b 19.10±1.02 b 1.57±0.11 b 0.082 2±0.007 1 b
柳氮磺胺吡啶组 247.65±8.12 b 0.45±0.01 b 20.21±1.09 b 1.49±0.12 b 0.074 1±0.005 9 b 说明样品序列充分，能够覆盖样品中的大部分微生物，
a：与对照组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05 可用于数据分析。结果见图2。

中国药房 2023年第34卷第6期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 6 · 695 ·