Page 40 - 《中国药房》2023年6期

2.8 大鼠海马组织中PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达 80 b
b b b
检测 a
60
采用Western blot法进行检测。取“2.5”项下各组大
鼠的海马组织，加裂解液研磨并于冰上裂解 30 min，蛋 糖水偏好率/% 40
白经BCA法检测浓度后，加蛋白上样缓冲液于100 ℃下
煮沸20 min变性，取变性蛋白适量行10%聚丙烯酰胺凝 20
胶电泳分离，湿法转膜，以5%脱脂奶粉室温封闭1 h；加
入 PI3K、Akt、mTOR、GSK-3β、GAPDH 一抗（稀释度分 0
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ Ⅶ
别为 1∶1 000、1∶10 000、1∶10 000、1∶1 000、1∶4 000）， Ⅰ：空白组；Ⅱ：模型组；Ⅲ：温阳解郁汤低剂量组；Ⅳ：温阳解郁汤
4 ℃孵育过夜；TBST 缓冲液清洗 10 min×3 次，加入二 中剂量组；Ⅴ：温阳解郁汤高剂量组；Ⅵ：氟西汀组；Ⅶ：逍遥散组；a：与
空白组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.01
抗（稀释度为1∶5 000），室温孵育1 h；TBST缓冲液清洗
图1 温阳解郁汤对大鼠糖水偏好率的影响
10 min×3 次后显色，使用凝胶成像系统显影并利用
250
Image J软件分析蛋白条带的灰度值，以目的蛋白与内参 a
b c b
（GAPDH）的灰度值比值作为目的蛋白的表达量。 200 c
2.9 大鼠海马组织中海马神经元树突棘数量检测 150 c
采用高尔基染色法进行检测。取“2.5”项下各组大 游泳静止不动时间/s
鼠的海马组织，置于4%多聚甲醛溶液中固定24 h，用水 100
清洗后，以梯度乙醇脱水，浸蜡、包埋后切片。切片用水 50
清洗4 min×2次后，置于混合液[溶液D-溶液E-水（1∶1∶
0
2，V/V/V）]中静置 10 min；用水清洗 4 min×2 次，用结晶 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ Ⅶ
紫染色，再依次以 50%、75%、95% 乙醇和无水乙醇梯度 Ⅰ：空白组；Ⅱ：模型组；Ⅲ：温阳解郁汤低剂量组；Ⅳ：温阳解郁汤
中剂量组；Ⅴ：温阳解郁汤高剂量组；Ⅵ：氟西汀组；Ⅶ：逍遥散组；a：与
脱水各4 min，重复4次；在二甲苯中透明4 min×3次后，
空白组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与模型组比较，
以中性树脂封片，置于显微镜下观察并记录海马组织中 P＜0.01
海马神经元树突棘数量。 图2 温阳解郁汤对大鼠强迫游泳静止不动时间的影响
2.10 统计学方法 3.3 温阳解郁汤对大鼠脏器指数的影响
采用SPSS 24.0软件对数据进行统计分析。数据以 与空白组比较，模型组大鼠肾上腺、胸腺、脾指数均
x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两 显著降低（P＜0.01）。与模型组比较，氟西汀组、逍遥散

比较采用LSD-t检验。检验水准α＝0.05。 组和温阳解郁汤中、高剂量组大鼠肾上腺、胸腺和脾指
3 结果 数均显著升高（P＜0.01或P＜0.05）。结果见表1。

3.1 温阳解郁汤对大鼠一般情况的影响
表1 温阳解郁汤对大鼠脏器指数的影响（x±s，n＝15）
随着造模时间的延长，模型组大鼠出现了掉毛、畏 组别 肾上腺指数/% 胸腺指数/% 脾指数/%
冷扎堆、蜷缩、精神不佳、活动量减少、进食减少的症状； 空白组 14.03±2.11 148.14±23.41 239.97±36.10
模型组 7.27±0.64 a 78.23±15.65 a 138.89±14.14 a
逍遥散组、氟西汀组和温阳解郁汤中、高剂量组大鼠的
温阳解郁汤低剂量组 7.28±1.54 82.10±16.08 147.98±16.65
上述症状在给药 7 d 后逐渐改善，而温阳解郁汤低剂量 温阳解郁汤中剂量组 10.12±2.06 b 97.90±11.18 c 209.94±20.21 b
组大鼠较模型组无明显变化。 温阳解郁汤高剂量组 10.03±2.09 c 97.97±16.13 c 214.51±20.20 b
氟西汀组 10.34±2.35 b 114.93±10.65 b 206.04±28.75 b
3.2 温阳解郁汤对大鼠行为学指标的影响 逍遥散组 9.69±1.32 c 95.09±7.50 c 196.22±19.12 b
3.2.1 糖水偏好率 与空白组比较，模型组大鼠的糖水 a：与空白组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.01；c：与模型组
偏好率显著降低（P＜0.01）。与模型组比较，氟西汀组、 比较，P＜0.05
逍遥散组和温阳解郁汤中、高剂量组大鼠的糖水偏好率 3.4 温阳解郁汤对大鼠血清中 cAMP、cGMP、BDNF、
均显著升高（P＜0.01）。结果见图1。 Glu、GABA水平的影响
3.2.2 静止不动时间 与空白组比较，模型组大鼠的静 与空白组比较，模型组大鼠血清中 cAMP、BDNF、
止不动时间显著延长（P＜0.01）。与模型组比较，各药 GABA 水平和 cAMP/cGMP 均显著降低，Glu 水平显著
物组大鼠的静止不动时间均显著缩短（P＜0.01 或 P＜ 升高（P＜0.01）。与模型组比较，各药物组大鼠血清中
0.05）。结果见图2。 cAMP（温阳解郁汤低剂量组除外）、BDNF（温阳解郁汤

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