Page 39 - 《中国药房》2023年6期
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cin，mTOR）单 克 隆 抗 体（批 号 分 别 为 Ab179463、             2.3 一般情况观察
          Ab134903）均购自英国Abcam公司；兔甘油醛-3-磷酸脱                       实验过程中，观察各组大鼠的精神状态、毛发、进食
          氢酶（GAPDH）单克隆抗体（批号AB0037）购自美国Ab‐                    和对外刺激反应等一般情况。
          ways公司；其余试剂均为分析纯，水为蒸馏水。                            2.4 大鼠行为学指标检测
          1.3 实验动物                                           2.4.1 糖水偏好率 末次给药后，在安静环境中对各组

              SPF 级雄性 SD 大鼠，体质量 180～220 g，购自北京               大鼠进行糖水偏好训练。大鼠禁食禁水24 h后，单独分
          维通利华实验动物技术有限公司，动物生产许可证号为                           笼，并于笼中同时放置已定量的2个水瓶（第1天，2瓶均
          SCXK（京）2016-0011。所有大鼠均饲养于山西中医药                     装有1%蔗糖水；第2天，其中1瓶蔗糖水被换成纯水），1
          大学动物实验室（室温24 ℃，12 h昼夜循环光照，空气流                      h后取走，称定质量并计算大鼠的糖水偏好率：糖水偏好
          通）内，适应性喂养 7 d，期间自由摄食饮水。本实验操                        率（%）＝糖水消耗量/（糖水消耗量+纯水消耗量）×
          作过程严格遵守实验动物伦理标准，并经过山西中医药                           100%。
          大学医学伦理委员会审批（批准编号2021DW159）。
                                                             2.4.2 静止不动时间 在糖水偏好训练的第1天进行强
          2 方法                                               迫游泳实验。将各组大鼠放入高 50 cm、直径 20 cm 的
          2.1 药液的制备
                                                             圆柱形筒中，水温为 25 ℃，水深约为 40 cm。强迫游泳
              按温阳解郁汤原方比例，称取桂枝、附子各15 g，炙
                                                             共进行 6 min，前 2 min 为适应阶段，后 4 min 为记录阶
          甘草10 g，生姜、乌梅各30 g，大枣5个。先取附子，加12
                                                             段，记录大鼠在水中的静止不动时间。
          倍量水，煎煮 1 h；再取剩余药味，加 12 倍量水，煎煮 1
                                                             2.5 大鼠样本采集及脏器指数检测
          h×3次；合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至浸膏状，干燥，
                                                                 上述实验完成后，所有大鼠禁食不禁水 12 h，麻醉
          得干膏（每 1 g 干膏对应生药总量 5 g），粉碎成细粉，
                                                             后于腹主动脉取血。血样静置 1～2 h，以 3 000 r/min 离
          备用。
                                                             心15 min，取上层血清，于－20 ℃冰箱中冻存，备用。取
              按逍遥散原方比例，称取柴胡、当归、白芍、白术、茯
                                                             血完成后，处死各组大鼠，分离其海马组织，置于冻存管
          苓各 30 g，炙甘草 15 g，干姜、薄荷各 10 g，加 10 倍量水
                                                             中，于液氮中迅速冷冻，待全部取材完成后移至－80 ℃
          浸泡40 min后煎煮2 h；药渣再加8倍量水煎煮1.5 h；合
                                                             冰箱中保存；摘取大鼠肾上腺、胸腺和脾，精确称定质量
          并煎液，滤过，滤液减压浓缩至稠膏状，干燥，得干膏（每
                                                             并计算各脏器指数：脏器指数（%）＝大鼠脏器湿质量/大
          1 g干膏对应生药总量10.27 g），粉碎成细粉，备用。
                                                             鼠体质量×100%。
          2.2 分组、造模与给药
                                                             2.6 大鼠血清中 cAMP、cGMP、BDNF、Glu、GABA 水
              将105只雄性SD大鼠按体质量分为7组，分别为空
                                                             平检测
          白组、模型组、氟西汀（西药阳性对照）组、逍遥散（中药
                                                                 取“2.5”项下各组大鼠的血清样品适量，采用酶标仪
          阳性对照）组和温阳解郁汤低、中、高剂量组，每组15只。
                                                             以 ELISA 法检测其血清中 cAMP、cGMP、BDNF、Glu、
          温阳解郁汤低、中、高剂量组大鼠的给药剂量分别为
                                                             GABA 水 平 ，并 记 录 cAMP 与 cGMP 的 比 值（cAMP/
          1.25、2.50、5.00 g/kg（以生药量计，中剂量根据临床成人
                                                             cGMP）。严格按照试剂盒说明书操作。
          等效剂量换算而得，以水为溶剂），氟西汀组大鼠给予氟
                                                             2.7 大鼠血清中NE、DA、5-HT含量检测
          西汀4.17 mg/kg（剂量根据临床成人等效剂量换算而得，
          以水为溶剂），逍遥散组大鼠给予逍遥散1.88 g/kg（以生                         取“2.5”项下各组大鼠的血清样品 500 μL，加入等
          药量计，剂量根据临床成人等效剂量换算而得，以水为                           体积的 5% 高氯酸溶液，于 4 ℃下以 14 000 r/min 离心
          溶剂），空白组及模型组大鼠灌胃水，灌胃体积均为 15                         10 min，取上清液，采用高效液相色谱仪以标准曲线法

          mL/kg，每天1次，连续28 d。                                 检测其中 NE、DA、5-HT 含量。色谱柱为 Diamonsil C18
              采用反复不定时皮下注射 CORT 20 mg/kg（CORT                （200 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-0.1 mol/L 磷
          先用1%二甲基亚砜溶解，再加至含0.1%聚山梨酯80的                        酸二氢钠缓冲液（10∶90，V/V）；流速为 1 mL/min；激发
          生理盐水中，超声 30 min 使成均匀混悬液）的方式建立                      波长为 254 nm，发射波长为 338 nm；柱温为 30 ℃；进样
                                                                       [9]
          肾阳虚型抑郁模型 ，并于造模的同时灌胃给药。空白                           量为 20 μL 。严格按照 2020 年版《中国药典》（四部）
                          [8]
          组大鼠皮下注射含二甲基亚砜、0.1% 聚山梨酯 80 的生                     “生物样品定量分析方法验证指导原则”进行方法学
          理盐水4 mL/kg。                                        考察。


          中国药房  2023年第34卷第6期                                                 China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 6    · 673 ·
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