Page 61 - 《中国药房》2023年5期

2.3.4 特征图谱的建立及相似度评价 取不同煎煮时 520
480 槲皮素 木犀草素
间的桑白皮汤煮散与汤剂样品（T1～T6和S1～S11），分 440 桑皮苷A 栀子苷 小檗碱 黄芩苷
400
别按“2.2”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。将色谱 360 混合对
照品
5 16
图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012 版）》 320 13
280
软件进行分析，分别选取样品 T6、S8 的图谱为参照图 U/mV 240 2 17 19
200 R-T
谱，时间宽度设定为 0.1 min，采用中位数法，经多点校 160
正，以Mark峰匹配得到桑白皮汤2种物质基准的特征图 120
80 5 12 14 15
谱（图 1、图 2），系统分别生成对照指纹图谱 R-T、R-S 及 40 2 17
0 R-S
相似度结果。结果显示，在桑白皮汤煮散样品 T1～T6
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150
中共确定了 21 个共有峰，相似度分别为 0.943、0.986、 t/min
0.991、0.999、0.997、1.000；在桑白皮汤汤剂样品S1～S11中 图3 混合对照品色谱图和2种基准物质对照指纹图谱
共确定了18个共有峰，相似度分别为0.983、0.984、0.982、 的叠加图
0.975、0.996、0.994、0.996、0.994、0.998、0.998、0.994。
液。精密吸取上述线性工作液和单个对照品溶液各 5
520
5 μL，按“2.2”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以被
480
13 16
440 3 8 10 11 14 20 测成分的峰面积为纵坐标（Y）、进样质量浓度为横坐标
400 1 2 4 6 7 9 12 15 17 18 19 21 R-T
360 （X）进行线性回归，得到各指标成分的回归方程以及线
320 T6 性范围（表 1）。结果显示，各待测成分在其质量浓度范
U/mV 280 T5 围内线性关系均良好（r均大于0.999 0）。
240
200 T4
160 表1 各指标成分的回归方程、线性范围和相关系数
120 T3
80 T2 指标成分 回归方程 r 线性范围/（μg/mL）
40 桑皮苷A Y＝5 298.2X－46.48 0.999 2 7.91～506.00
0 T1 栀子苷 Y＝8 289.9X－10.034 0.999 9 17.02～1 089.00
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 小檗碱 Y＝33 680X－57.565 0.999 7 7.80～499.00
t/min 黄芩苷 Y＝14 059X－246.85 0.999 5 15.78～1 010.00
图1 桑白皮汤煮散物质基准的特征图谱与对照指纹图 槲皮素 Y＝41 243X－536.09 0.999 3 8.16～522.00
谱R-T 木犀草素 Y＝32 159X－157.36 0.999 2 7.97～510.00
2.4.2 精密度试验 精密吸取“2.1.3”项下混合对照品
520
5
480 12 14 溶液，按“2.2”项下色谱条件连续进样测定 6 次，记录峰
440 1 2 3 4 6 7 8 9 10 11 13 15 16 17 18 R-S
400 S11 面积。结果显示，桑皮苷A、栀子苷、小檗碱、黄芩苷、槲皮
360 S10
320 S9 素、木犀草素峰面积的RSD分别为1.15%、1.11%、1.17%、
U/mV 280 S8 0.72%、1.76%、1.44%（n＝6），表明仪器精密度良好。
240
S7
200 S6 2.4.3 稳定性试验 取“2.1.2”项下供试品溶液（S8），分
160 S5
120 S4 别在室温放置0、4、8、16、20、24 h，然后按“2.2”项下色谱
80 S3 条件进样测定，记录峰面积。结果显示，桑皮苷A、栀子
40 S2
0 S1 苷、小檗碱、黄芩苷、槲皮素、木犀草素峰面积的 RSD 分
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 别为1.69%、0.16%、0.81%、1.21%、0.60%、0.91%（n＝6），
t/min
图2 桑白皮汤汤剂物质基准的特征图谱与对照指纹图 表明该供试品溶液在室温放置24 h内稳定性良好。
2.4.4 重复性试验 按“2.1.2”项下方法平行制成6份供
谱R-S
试品溶液（S8），然后按“2.2”项下色谱条件进样测定，记
2.3.5 共有峰的指认 取“2.1.3”项下混合对照品溶液， 录峰面积，并按外标法计算各成分的含量。结果显示，
稀释 32 倍，按“2.2”项下色谱条件进样测定，记录色谱 桑皮苷A、栀子苷、小檗碱、黄芩苷、槲皮素、木犀草素含
图，并与“2.3.4”项下对照指纹图谱R-T、R-S比对进行色 量的 RSD 分别为 1.39%、0.31%、0.50%、0.92%、0.48%、
谱峰的指认，结果见图3。结果，指认出桑白皮汤煮散物 0.73%（n＝6），表明该方法的重复性良好。
质基准特征图谱中2、5、13、16、17、19号峰和汤剂物质基 2.4.5 加样回收率试验 精密量取已知含量的样品
准特征图谱中 2、5、12、14、15、17 号峰分别为桑皮苷 A、 （S8）1 mL，共6份，分别按已知成分含量1∶1的质量比加
栀子苷、小檗碱、黄芩苷、槲皮素、木犀草素。 入“2.1.3”项下的单个对照品溶液（桑皮苷A对照品溶液
2.4 桑白皮汤物质基准的含量测定 80 μL、栀子苷对照品溶液 540 μL、小檗碱对照品溶液
2.4.1 线性关系考察 精密吸取“2.1.3”项下单个对照 290 μL、黄芩苷对照品溶液 270 μL、槲皮素对照品溶液
品溶液各适量，分别稀释 2、4、8、32、64 倍作为线性工作 45 μL、木犀草素对照品溶液 70 μL），混匀，按“2.1.2”项

中国药房 2023年第34卷第5期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 5 · 567 ·