Page 49 - 《中国药房》2023年5期

GPx4 and SLC7A11 in the renal tissues. RESULTS Compared with sham operation group， serum levels of Cr and BUN， the
concentration of Fe in renal tissue， the protein and mRNA levels of Fn and α-SMA in model group were increased significantly
2+
（P＜0.05）， while the activity of T-SOD in serum， protein and mRNA expressions of Nrf2， GPx4， SLC7A11 in kidney tissue were
significantly decreased （P＜0.05）； in the kidney tissue， the renal tubules were dilated， the collagen deposition was obvious， the
fibrous bands were thicker and darker， and the renal interstitial inflammatory cells infiltrated significantly. After intervened with
obacunone， the levels of above indexes （except for mRNA expression of SLC7A11 in obacunone low-dose group） in serum and
renal tissue were reversed significantly （P＜0.05）， and pathological damage and collagen deposition of kidney tissue were
alleviated. CONCLUSIONS Obacunone can improve renal interstitial fibrosis of UUO model mice， the mechanism of which may
be associated with activating the Nrf2/GPx4 pathway and then inhibiting ferroptosis to relieve RIF in UUO model mice.
KEYWORDS obacunone； renal interstitial fibrosis； unilateral ureteral obstruction； Nrf2/GPx4 signaling pathway； ferroptosis

慢性肾脏病（chronic kidney disease，CKD）的发病率 （creatinine ，Cr）、血尿素氮（blood urea nitrogen ，BUN）、
[1]
逐年上升，已成为全球性公共卫生问题 。肾间质纤维 总超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase ，T-SOD）、
化几乎是所有 CKD 进展至终末期的共同途径，延缓肾 丙二醛（malondialdehyde，MDA）试剂盒均购自南京建成
[2]
间质纤维化进程是治疗 CKD 的关键 。铁死亡是近年 生物工程研究所有限公司（批号分别为C011-2-1、C013-
2+
来新发现的铁依赖性、非凋亡的调节性细胞死亡方式， 2-1、A001-1-2、A003-1-2）；Fe 浓度检测试剂盒购自东仁
核转录因子红系 2 相关因子 2（nuclear factor erythroid 化学科技（上海）有限公司（批号 I291）；免疫组化试剂
2-related factor 2，Nrf2）、谷胱甘肽过氧化物酶 4（gluta- 盒、DAB显色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公
[3]
thione peroxidase 4，GPx4）是铁死亡的关键调控因子 。 司（批号分别为 PV-9000、ZLI-9018）；兔抗 GAPDH 多克
研究发现，大多数 CKD 患者会出现不同程度的铁代谢 隆抗体购自武汉三鹰生物技术有限公司（批号 60004-
紊乱和脂质代谢紊乱，铁代谢紊乱可导致铁在肾脏中沉 1）；兔抗小鼠Nrf2、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle
积，进而诱导铁死亡；脂代谢紊乱可导致肾实质脂质沉 actin，α-SMA）单克隆抗体购自美国CST公司（批号分别
积，促进脂质过氧化，进一步诱导铁死亡 。 为 12721T、19245S）；兔抗小鼠纤连蛋白（fibronectin，
[4]
黄柏酮是从黄柏、白鲜皮等植物中提取的天然化合 Fn）、GPx4、溶质载体家族7成员11（SLC7A11）多克隆抗
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[5]
物，属于柠檬苦素类三萜化合物，具有抗炎 、抗氧化 、 体购自美国Abcam公司（批号分别为ab2413、ab125066、
[7]
抗肿瘤 等多种药理活性。现有研究发现，黄柏酮是一 ab216876）。本研究所用引物均由生工生物工程（上海）
种强效的Nrf2激动剂，可以延缓常染色体显性遗传性多 股份有限公司合成，引物序列及扩增产物长度见表1。
[9]
[8]
囊肾病中肾囊肿的进展 ，有效缓解肺纤维化 、肝纤维 表1 引物序列及扩增产物长度
化 ，但其对肾间质纤维化的改善作用及机制仍不清 基因 引物序列（5′→3′） 扩增产物长度/bp
[10]
楚。因此，本研究探索黄柏酮对单侧输尿管梗阻（unila- Fn 上游引物：CCCTATCTCTAGTACCGTTGTCC 145
下游引物：TGCCGCAACTACTGTGATTCGG
teral ureteral obstruction，UUO）模型小鼠肾间质纤维化 α-SMA 上游引物：TGCTGACAGAGGCACCACTGAA 138
的影响，并通过Nrf2/GPx4信号通路探讨其作用机制，以 下游引物：CAGTTGTACGTCCAGAGGCATAG
期为黄柏酮的药理研究及开发利用提供参考。 Nrf2 上游引物：CAGCATAGAGCAGGACATGGAG 107
下游引物：GAACAGCGGTAGTATCAGCCAG
1 材料 GPx4 上游引物：CCTCTGCTGCAAGAGCCTCCC 144
1.1 主要仪器 下游引物：CTTATCCAGGCAGACCATGTGC
本研究所用主要仪器包括LightCycler480 Ⅱ型实时 SLC7A11 上游引物：CTTTGTTGCCCTCTCCTGCTTC 136
下游引物：CAGAGGAGTGTGCTTGTGGACA
荧光定量聚合酶链反应（PCR）仪（瑞士 Roche 公司）， GAPDH 上游引物：TGGCCTTCCGTGTTCCTAC 178
Mini-Protein Tetra System 型蛋白质电泳转印系统、凝胶 下游引物：GAGTTGCTGTTGAAGTCGCA
成像系统（美国 Bio-Rad 公司），DM500 型生物显微镜 1.3 动物
（日本 Olympus 公司），Synergy2 型多功能酶标仪（美国
本研究所用动物为健康SPF级雄性C57BL/6小鼠，
Bio-Tek公司）。
体质量 22～25 g，6～8 周龄，购自成都药康生物科技有
1.2 主要药品与试剂
限公司，实验动物生产许可证号为SCXK（川）2020-034。
黄柏酮（批号PCS-211109，纯度≥98%）购自成都植
小鼠于12 h光照、12 h黑暗环境中常规饲养，自由摄食、
标化纯生物技术有限公司；苏木精-伊红（HE）染色试剂
盒、羊抗兔免疫球蛋白 G（批号分别为 C0105S、A0208） 饮水。本实验过程严格按照《实验动物福利伦理审查指
购自上海碧云天科技有限公司； Masson染色试剂盒（批 南（GB/T 35892-2018）》要求执行，经西南医科大学实验
号 BA4079A）购自珠海贝索生物技术有限公司；肌酐 动物伦理委员会批准，批准号为swmu20220107。

中国药房 2023年第34卷第5期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 5 · 555 ·