Page 73 - 《中国药房》2023年4期
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2.6.2 Western blot 实验 取“2.2”项下冻存的皮肤组               表1 各组大鼠背部皮肤 EASI 评分、耳肿胀度、病理评
          织，加入含 1%PMSF 的 RIPA 裂解液，匀浆后，在 4 ℃下                      分的检测结果（x±s，n＝10）
          以 13 000 r/min 离心 15 min。取上清液，采用 BCA 蛋白             组别         EASI评分/分     耳肿胀度/mg      病理评分/分
          定量法测定蛋白浓度。取蛋白样品以 5×上样缓冲液                            正常组          0            0             0
                                                              模型组        6.83±0.75 a  22.63±1.78 a  17.50±0.84 a
          稀释，并于 100 ℃下加热 50 min 使变性。取变性蛋白
                                                              氯雷他定组      2.67±0.82 b  5.48±0.61 b   7.00±0.89 b
          适量，经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后                            TWP组       2.50±0.84 b  5.62±0.42 bc  6.50±0.84 b
          转移至聚偏二氟乙烯膜，以 5% 脱脂奶粉封闭 2 h，加入                       TGP组       2.67±0.82 b  5.27±0.32 bc  6.67±0.82 b
          p38 MAPK、p-p38 MAPK、β-actin 一抗（稀释度分别为               配伍组        2.67±0.82 b  3.33±0.62 b   6.17±0.75 b
          1∶1 000、1∶1 000、1∶3 000），于4 ℃下孵育过夜；以TBST              a：与正常组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与配伍组
                                                             比较，P＜0.05
          溶液清洗5 min×3次，加入HRP标记的山羊抗兔IgG二
          抗（稀释度 1∶1 000），于室温下孵育 30 min；以 TBST 溶              3.2 大鼠耳肿胀度检测结果
          液清洗 5 min×3 次，用 ECL 显影。采用 Image J 1.8.0 软              与正常组比较，模型组大鼠的耳肿胀度显著升高
          件分析条带灰度值，以 p-p38 MAPK 与 p38 MAPK 的灰               （P＜0.05）；与模型组比较，各药物组大鼠的耳肿胀度均
          度值比值（p-p38 MAPK/p38 MAPK）来表示 p38 MAPK              显著降低，且配伍组显著优于 TWP、TGP 组（P＜0.05）。
          蛋白的磷酸化水平。                                          结果见表1。
          2.7 大鼠炎症、肝肾功能、氧化应激指标检测                             3.3 大鼠背部皮肤组织形态学观察及病理评分结果
              取“2.2”项下各组大鼠的血清样品适量，使用酶标仪
                                                                 模型组大鼠背部皮肤表皮厚度较正常组明显增加，
          检测其血清中炎症因子（IL-4、IFN-γ）和肝肾功能指标
                                                             角化程度高，呈网状并伴有海绵样水肿，毛囊口可见角
         （GPT、GOT、SCr、BUN）水平；取“2.2”项下各组大鼠的
                                                             栓；真皮层可见血管轻度扩张、充血和炎症细胞浸润。
          肝、肾组织50 mg，制备匀浆后，使用酶标仪检测其肝、肾
          组织中氧化应激指标（T-SOD、MDA）水平。严格按照试                       氯雷他定组、TWP组、TGP组大鼠背部皮肤表皮均增厚，
          剂盒说明书方法操作。                                         可见海绵样水肿，且TWP组、TGP组大鼠毛囊口可见角
          2.8 统计学方法                                          栓。配伍组大鼠背部皮肤表皮轻微增厚，未见海绵样水
              采用SPSS 26.0软件对数据进行统计分析。计量资                     肿、空泡和炎症细胞浸润。结果见图2。
          料均以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组
          间两两比较采用 LSD-t 检验（方差齐）或 Dunnett’s 检验
         （方差不齐）。检验水准α＝0.05。
          3 结果
          3.1 大鼠背部皮肤观察及湿疹严重度评分结果                                  A.正常组           B.模型组          C.氯雷他定组
              正常组大鼠生存状态良好，皮肤光滑完整，未见明
          显异常；模型组大鼠背部造模区皮肤出现红肿、丘疹、水
          疱、糜烂和渗出等湿疹症状；各药物组大鼠背部造模区
          皮肤红肿、糜烂和渗出症状均有所改善，丘疹和水疱均呈
          不同程度消散，皮肤较模型组明显光滑。结果见图1。                                D. TWP组         E. TGP组         F.配伍组
                                                                黑色箭头：海绵样水肿；黄色箭头：角栓；蓝色箭头：炎症细胞
                                                             图2 各组大鼠背部皮肤组织病理形态显微图（HE 染
                                                                  色，×400）
                                                                 与正常组比较，模型组大鼠背部皮肤的病理评分显
                                                             著升高（P＜0.05）；与模型组比较，各药物组大鼠背部皮
              A.正常组            B.模型组         C.氯雷他定组
                                                             肤的病理评分显著降低（P＜0.05）。结果见表1。
                                                             3.4 大鼠皮肤组织中p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表
                                                             达水平及p38 MAPK蛋白磷酸化水平的检测结果
                                                                 免疫组化实验结果显示，与正常组比较，模型组大
              D. TWP组         E. TGP组          F.配伍组         鼠皮肤组织中 p38 MAPK、p-p38 MAPK 蛋白的表达水
                    图1 各组大鼠背部皮肤形态图                           平均显著升高（P＜0.05）；与模型组比较，各药物组大鼠
              与正常组比较，模型组大鼠背部皮肤的 EASI 评分                      皮肤组织中 p38 MAPK、p-p38 MAPK 蛋白的表达水平
          显著升高（P＜0.05）；与模型组比较，各药物组大鼠背部                       均显著降低，且配伍组上述指标均显著低于 TWP、TGP
          皮肤的EASI评分均显著降低（P＜0.05）。结果见表1。                      组（P＜0.05）。结果见图3、表2。


          中国药房  2023年第34卷第4期                                                 China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 4    · 447 ·
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