Page 27 - 《中国药房》2022年22期
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结果（表 2）显示，与空白组比较，模型组大鼠血清                       2.2 优势药性组的成分鉴定
          CRP、TNF-α 含量均显著增高（P＜0.01），SOD 抑制率                  2.2.1 供试品溶液的制备 根据药性拆分组的生物效

          显著降低（P＜0.01）。与模型组比较，全方组和苦寒组                        应研究结果，取优势药性组（辛温组、苦寒组）各单味药
          大鼠血清 CRP、TNF-α 含量均显著降低（P＜0.05 或                    细粉，按“2.1.2”项下方法制备相应提取物。取上述提取
          P＜0.01），SOD 抑 制 率 均 显 著 升 高（P＜0.05 或 P＜            物各1 g，置于25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，制成
          0.01）；此外，甘平组大鼠 TNF-α 含量和 SOD 抑制率也                  相应供试品溶液，经0.22 μm微孔滤膜滤过，备用。
          均有显著改善（P＜0.05 或 P＜0.01）。可见，该方的抗                    2.2.2  色 谱 条 件  以 ACQUITY  UPLC  BEH  C18 （2.1
                                                             mm×50 mm，1.7 μm）为色谱柱，以 0.1% 甲酸溶液（B）-
          炎泻热作用主要来源于方中的苦寒药材。
         表2 桃核承气汤及其药性拆分成分对模型大鼠炎症指                            乙腈（C）为流动相进行梯度洗脱（0～20.0 min，5%C→
               标的影响（x±s，n＝6）                                 40%C，20.0～33.0 min，40%C→90%C；33.0～35.0 min，
          组别        CRP/（pg/mL）   TNF-α/（ng/mL）  SOD抑制率/%    90%C；35.0～35.1  min，90%C→5%C；35.1～40.0  min，
          空白组      1 279.12±256.47  73.65±24.26  59.04±7.23  5%C）；流速为0.2 mL/min；柱温为30 ℃；进样量为2 μL。
          模型组      1 562.86±89.43 a  184.80±29.37 a  44.60±4.34 a
          全方组      1 369.21±76.20 b  123.49±5.21 c  55.00±7.53 c  2.2.3 质谱条件 采用电喷雾离子源（electrospray ioni-
          苦寒组      1 356.55±150.22 b  128.33±10.67 c  53.13±2.58 b  zation，ESI）进行正、负离子模式切换扫描；鞘气为氮气，
          辛温组      1 417.37±108.84  157.35±26.18  49.00±6.07
          甘平组      1 391.53±174.95  146.51±32.34 c  52.22±4.97 b  流速为 10.5 L/min；辅助气为氮气，流速为 3.0 L/min；毛
             a：与空白组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与模型组          细管温度为550 ℃；喷雾电压为3.5 kV；离子扫描范围为
         比较，P＜0.01                                           m/z 120～1 000。
          2.1.6 凝血、炎症指标分析 利用 SIMCA-P 软件对凝                    2.2.4 成分鉴定 取“2.2.1”项下各供试品溶液适量，按
          血、炎症指标数据进行标准化处理，随后以空白组和模                          “2.2.2”“2.2.3”项下条件进行 UPLC-Q-Exactive-MS 分
          型组为基准，以药性拆分组与基准组之间的距离为主要                           析，得总离子流图（图略）。利用 Xcalibur 软件在质量偏

          因素，以药性拆分组图形离散程度为次要因素，进行离                           差＜5 ppm 的范围内提取各成分的元素组成并进行一
          散度趋势分布分析和偏最小二乘法-判别分析（partial                       级、二级质谱解析，通过参考相关文献                [14―18] ，从辛温组样
          least squares-discriminant analysis，PLS-DA）。结果见图   品图谱中共鉴定出32个活性成分，包括木兰花碱、羟基
          2、图 3。基于越接近空白组、越远离模型组则该组的性                         酪醇、脱落酸、苦杏仁苷、草夹竹桃苷、白果内酯、球腺糖
          质越趋于空白组的原则，可得出各给药组的化瘀药效依                           苷A、甘草苷、对羟基肉桂酸、原花青素B1、原儿茶酸、右
          次为全方组＞辛温组＞苦寒组＞甘平组，泻热药效依次                           旋奎宁酸、二氢槲皮素等；从苦寒组样品图谱中共鉴定
          为全方组＞苦寒组＞甘平组＞辛温组，即辛温组的抗凝                           出35个化学成分，包括7-甲氧基-4-甲基香豆素、芦荟大
          作用较好，苦寒组的抗炎作用较好，两者为优势药                             黄素、黄芩素、香豆素、紫花前胡醇、去甲蟛蜞菊内酯、大

          性组。                                                黄素、大黄素甲醚、尼泊金乙、松柏醛、刺芒柄花素、黄豆
                                                             黄素、羟基芫花素、淫羊藿素、L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、原
           PT                     CRP
           PTA
          APTT                   TNF-α                       儿茶醛等。
           FIB
           TT                     SOD                        2.3 靶点获取与分子对接
          ET-1
                                       模型组        辛温组         甘平组         苦寒组         全方组         空白组  2.3.1 “化瘀”和“泻热”相关靶点的获取 为使所获靶
               模型组      辛温组       甘平组       苦寒组       全方组       空白组
                 A.凝血指标                   B.炎症指标
             图2 凝血指标和炎症指标的离散度趋势分布图                           点能与“2.1”项下药效学研究结果互证，本研究以“pro‐
                                                             thrombin”“thrombin”“fibrinogen”“endothelin-1”“C reac‐
             t[1]                       t[1]
                 0  1  2  3 4  5        2                    tive  protein”“tumor  necrosis  factor- α”“superoxide  dis‐
                              6
                               7
                                5    6  4            0 2
                                4   3                 4      mutase”为关键词，在 UniProt 数据库（https：//www.uni‐
                               3    2                 6
                               2    1                 2      prot.org/）中检索与凝血指标（PT、PTA、APTT、FIB、TT、
                               1    0                 1
                               0   －1                        ET-1）、炎症指标（CRP、TNF-α、SOD）密切相关的蛋白，
            －0.8                   －2                0 t[1]
            －0.4              －1                    －1
              0               －2   －3               －2
              0.4                                            并在 RCSB PDB 数据库（https：//www.rcsb.org/）中筛选
              0.8       4  5  6  Num                －3
                  1  2  3         Num  －2 －1  0  1
              t[2]                              2  3 －4      出与上述药效指标相对应的基因，随后选取该基因的低
            空白组      模型组       全方组       苦寒组       辛温组       甘平组  空白组      模型组       全方组       苦寒组       辛温组       甘平组
                  A.凝血指标                 B.炎症指标              分辨率构象作为对接受体。按上述方法筛选，共得到凝
              图3 凝血指标和炎症指标的PLS-DA得分图                         血指标相关靶点 6 个，分别为 F2（PT）、F9（PTA）、F11
          中国药房  2022年第33卷第22期                                              China Pharmacy  2022 Vol. 33  No. 22    · 2709 ·
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