Page 28 - 《中国药房》2022年22期
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（TT）、AT3（TT）、FGA（FIB）、EDN1（ET-1），构象分别为               3 讨论
          5NHU、3KCG、7MBO、2B5T、1FZD、1T7H；共得到炎症                    《伤寒论》中将外邪入血称作蓄血证，其病机一则为
          相关靶点5个，分别为CRP（CRP）、LITAF（TNF-α）、TNF                 瘀，二则为热，是太阳表邪不解，邪气入里化热，继而由
         （TNF- α）、SOD1（SOD）、SOD2（SOD），构 象 分 别 为               各种原因引起的瘀血与邪热互结的临床证候的统称。
          3PVN、AF-Q99732-F1-model-v2、2E7A、2XJK、1PL4。          目前，研究者多采用细菌或细菌内毒素（如LPS，属于中

          2.3.2 活性化合物的准备及分子对接 以“2.2.4”项下                      医的热邪、毒邪）干预的方法来复制蓄血证动物模型。
          鉴定出的辛温组、苦寒组药材成分为目标成分，将其                             研究表明，蓄血证与凝血功能、炎症反应密切相关，故这
          CAS号输入TCMSP数据库（https：//tcmsp-e.com）和Swiss           两项指标的检测是蓄血证诊断的重要依据 。
                                                                                                  [21]
          Target  Prediction 数 据 库（http：//www. swisstargetpredic‐  本研究复制了瘀热互结的蓄血证大鼠模型，病理观
                                               [19]
          tion.ch/），以口服生物利用度≥30% 为标准 ，分别从辛                    察结果显示，模型组大鼠肝组织表现出局部血液凝集的
          温组、苦寒组药材成分中筛选出可作为对接配体的成分                            瘀热互结现象。给予桃核承气汤及其药性拆分成分干
          13、17个。                                             预 后 ，全 方 组 和 辛 温 组 大 鼠 的 凝 血 指 标（PT、PTA、
              利用 Pymol 软件获取“2.3.1”项下受体的对接口袋                   APTT、FIB、TT、ET-1）全部得到明显改善，全方组和苦寒
          信息，使用 AutoDock Vina 软件进行对接并使用 TBtools               组大鼠炎症因子（CRP、TNF-α、SOD）的释放得到明显抑
          软件和 Pymol 软件绘制对接结果热图。结果（图 4）显                       制；结合离散度趋势分布分析和PLS-DA结果发现，该方
          示，配体与受体结合较好（即结合能≤－5.0 kcal/mol，                     化瘀的物质基础来自辛温组药材，泻热的物质基础来自
          1 kcal＝4.186 kJ） 的辛温组成分有 10 个，苦寒组成分                 苦寒组药材，即辛温组、苦寒组为优势药性组。
                         [20]
          有13个。                                                   有研究指出，辛温之性药材可温经通脉以助化瘀，

                            结合能/（kcal/mol）          结合能/（kcal/mol）  能使血液流变学及血流动力学异常得以改善，是化瘀作
                               －5.0
           －8.40 －7.34 －7.24 －7.90 －8.50 －7.40  白果内酯  －7.80 －6.40 －7.90 －6.90 －8.30  芦荟大黄酸  －5.0
                               －6.0                    －5.5
           －9.80 －8.70 －7.40 －7.60 －9.00 －7.70  原花青素B1  －7.0  －8.70 －5.60 －7.90 －6.20 －8.00  去甲蟛蜞菊内酯  －6.0  用的表现；苦寒之性药材大多为疏下之药，既能清除里
                                                       －6.5
                               －8.0  －6.90 －6.10 －7.60 －6.50 －7.40  刺芒柄花素  －7.0
           －7.20 －8.80 －5.30 －8.20－10.10 －8.40  脱落酸  －5.70 －8.10 －5.40 －5.00 －5.50  尼泊金乙  －7.5
                               －9.0                    －8.0
           －6.40 －6.80 －5.70 －7.20 －7.30 －6.40  右旋奎宁酸  －10.0  －6.50 －9.10 －6.30 －5.60 －6.20  L-酪氨酸  －8.5  热 ，又 能 下 瘀 ，使 热 随 大 便 而 出 ，是 泻 热 效 应 的 表
                                                       －9.0
           －9.20 －6.00 －6.80 －6.40 －6.40 －6.30  二氢槲皮素  －11.0  －6.50 －9.10 －5.80 －5.80 －6.10  L-苯丙氨酸  －9.5  [22―23]
                                   －7.80 －5.80 －8.10 －6.70 －8.00  羟基芫花素  现  。为进一步明确辛温组化瘀和苦寒组泻热的物
           －6.50 －8.30 －5.20 －8.50 －8.60 －7.40  羟基酪醇
                                   －9.30 －5.70 －7.90 －7.30 －7.80  黄芩素
           －7.00 －5.80 －5.30 －5.70 －6.30 －5.80  对羟基肉桂酸  －8.40 －6.00 －8.10 －6.60 －8.40  大黄素  质基础，本研究采用 UPLC-Q-Exactive MS 技术从辛温
           －9.30 －6.00 －6.60 －6.90 －6.90 －6.10  甘草苷  －8.00 －6.20 －8.30 －6.40 －8.50  大黄素甲醚
                                   －7.10 －5.90 －7.30 －6.40 －7.50  黄豆黄素
           －7.00 －8.00 －5.30 －8.50 －8.40 －7.40  原儿茶酸          组中鉴定出 32 个化合物，从苦寒组中鉴定出 35 个化
                                   －5.90 －6.40 －5.50 －5.80 －5.60  松柏醛
           －9.20 －6.30 －6.80 －6.50 －6.40 －6.00  苦杏仁苷  －6.10 －6.20 －5.00 －5.10 －5.50  原儿茶醛
            F2     F9     F11   AT3  FGA EDN1  CRP LITAF TNF SOD1 SOD2  合物。随后，利用分子对接技术，最终筛选出结合能≤
               A.辛温组                   B.苦寒组                  －5.0 kcal/mol 的辛温组成分 10 个（脱落酸、羟基酪醇、
            图4 结合能≤≤－－5.0 kcal/mol的分子对接结果热图
                                                              原花青素 B1 等）、苦寒组成分 13 个（黄芩素、芦荟大黄
              使用Pymol软件绘制出对接结合能最小的“成分-靶                       素、去甲蟛蜞菊内酯等），提示上述成分分别为两组“性-
          点”空间构象。以辛温组药材成分脱落酸（图5A）为例，                          效”相关的关键物质。
          其与凝血指标相关靶点FGA活性位点（1FZD构象）的氨                             笔者在研究中还发现，甘平组药物也显示出仅次于
          基酸残基 PHE-769 之间存在疏水作用，与氨基酸残基                        苦寒组的抗炎泻热效应。中医认为，平性药是药性平
          TRY-816、GLU-782、ASN-667之间存在氢键。以苦寒组                  和、作用力和缓、功效及应用范围比较广泛的一类药物；
          药材成分黄芩素（图 5B）为例，其与炎症指标相关靶点
                                                              现代研究认为，该类药物含有黄酮类、萜类、甾体类、糖
          CRP活性位点（3PVN构象）的氨基酸残基RPO-206之间                      类等成分，具有“双向适用，条件显性”的药性特点 。
                                                                                                           [24]
          存在π-π共轭，与氨基酸残基TRP-205、GLN-203之间存
                                                              但本研究仅结合药效学结果对优势药性组的成分进行
          在氢键。                                                了分析，并未考虑甘平组药材，也未考虑全方共煎的成
                                                              分变化，故有待后续研究予以完善，以进行更深层次的
                                                              药性与药效物质基础研究。
                                                              参考文献
                                                              [ 1 ]  ZHANG J，GUO W N，LI Q，et al. Discriminant analysis
                                                                   of traditional Chinese medicinal properties based on holis‐
                                                                                      1
                 A.脱落酸和FGA               B.黄芩素和CRP                 tic  chemical  profiling  by  H-NMR  spectrometry[J].  Evid
                   图5 成分与靶点结合的空间构象                                 Based Complement Alternat Med，2020，2020：3141340.


          · 2710 ·    China Pharmacy  2022 Vol. 33  No. 22                            中国药房  2022年第33卷第22期
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