Page 62 - 《中国药房》2022年21期
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to the change of membrane permeability.
          KEYWORDS     flavaspidic acid BB；skin and soft tissue infections；methicillin-resistant Staphylococcus aureus；methicillin-
          sensitive Staphylococcus aureus；antibacterial activity；skin abscess


              皮肤和软组织感染（skin and soft tissue infection，        美 仑 生 物 技 术 有 限 公 司 ；夫 西 地 酸 对 照 品（批 号
          SSTI）为外科常见的感染性疾病，金黄色葡萄球菌是其                          Z19J6Q1，纯度大于99%）购自上海源叶生物科技有限公
          最主要的致病菌       [1―2] 。抗生素的出现使SSTI得到了有效               司；头孢西丁钠对照品（批号YQ200524，纯度大于99%）
          控制，但随着抗生素的广泛应用，具有多重耐药性特征                            购自深圳信立泰药业股份有限公司；CAMHB 肉汤培养
          的 耐 甲 氧 西 林 金 黄 色 葡 萄 球 菌（methicillin-resistant     基（批号3302092）、营养琼脂培养基（批号1067752）均购
          Staphylococcus aureus，MRSA）在全球广泛流行       [3―4] 。目   自广东环凯微生物科技有限公司。
          前临床上用于治疗SSTI的局部外用抗生素主要有红霉                           1.3 菌株
                                 [2]
          素、夫西地酸、莫匹罗星等 ，而 MRSA 对红霉素具有高                            金黄色葡萄球菌 ATCC29213（质控菌株）购自广东
                                 [5]
          度耐药性，耐药率高达85% ，MRSA和甲氧西林敏感金                         省微生物菌种保藏中心。10株MRSA（编号MRSA11～
          黄色葡萄球菌（methicillin-sensitive Staphylococcus au‐     MRSA20）和 13 株 MSSA（编 号 MSSA23～MSSA28、
          reus，MSSA）对夫西地酸、莫匹罗星的敏感性在全球部                        MSSA32～MSSA38）均由广东莱恩医药研究院有限公
          分地区也呈现明显的下降趋势              [6―7] 。近年来，研究发现          司惠赠。
          许多天然产物具有较好的抗菌效果                [8―9] ，因此从天然产        1.4 动物
          物中寻找新的治疗SSTI的药物具有重要意义。                                  本研究所用动物为 SPF 级 KM 小鼠，雌性，体质量
              香鳞毛蕨 Dryopteris fragrans（L.）Schott 为鳞毛蕨         18～22 g，购自广东省医学实验动物中心，动物生产许可
          科鳞毛蕨属植物，民间常用香鳞毛蕨的水提液涂搽患处                            证号为 SCXK（粤）2018-0002。小鼠饲养环境符合 SPF
          来治疗牛皮癣、皮疹、皮炎、痤疮等 。本课题组前期研                           标准，温度为 20～25 ℃，相对湿度为 40%～70%。本动
                                        [10]
          究发现，香鳞毛蕨中含量最高的间苯三酚类单体化合物                            物实验经广东药科大学实验动物伦理委员会审查并批
          黄绵马酸BB（其化学结构式见图1）对皮肤癣菌（如红色                          准执行（批准号为gdpulac2019215）。
                 [11]
          毛癣菌） 、SSTI 致病菌（如金黄色葡萄球菌）                [12―13] 均具  2 方法
          有较好的体外抗菌活性。基于此，本研究采用平板法、棋盘                          2.1  黄绵马酸BB对受试菌株的体外抗菌作用考察
          稀释法以及小鼠皮肤脓肿模型进一步综合评价黄绵马                             2.1.1  菌液的制备      受试菌株在 CAMHB 肉汤培养基
          酸BB对金黄色葡萄球菌（MRSA和MSSA）的体内外抗                         中复苏 18～24 h，再接种于营养琼脂培养基上，于 35 ℃
          菌作用及机制，以期为该化合物的开发及利用提供参考。                           恒温培养 18～24 h 至对数生长期，然后用 0.9% 无菌生
                                                              理盐水快速吹打菌落，收集菌液，用麦氏比浊管法调整
                                                              菌液浓度至1.0×10 CFU/mL，备用。
                                                                              8
                                                              2.1.2  最小抑菌浓度和最小杀菌浓度的测定                    采用
                                                              CLSI M07-A9 方案中微量稀释法进行测定。将受试菌
                    图1   黄绵马酸BB的化学结构式                         菌液浓度调整至 1.0×10 CFU/mL，取 100 μL 接种于 96
                                                                                   6
          1 材料                                                孔板中，再加入 100 μL 各药物的倍比稀释溶液（黄绵

          1.1  主要仪器                                           马酸 BB、莫匹罗星、红霉素、夫西地酸的终质量浓度
              本研究所用主要仪器有 BKQ-Z301 型高压灭菌锅                      范围分别为2.5～1 280.0、0.062 5～5 120、0.125～5 120、
                                                              0.012 5～5 120 μg/mL），于 35 ℃培养 18～24 h，肉眼观
         （广州浩翰仪器有限公司），E-1010型电热恒温恒湿培养
                                                              察孔内受试菌的生长情况，若孔内无细菌生长，则该孔
          箱（德国Memmert公司），SW-CJ-1F型超净工作台（苏州
                                                              对应的浓度即为药物的最小抑菌浓度（minimum inhibi‐
          安泰空气技术有限公司），Infinite 200 PRO 型多功能酶
                                                              tory concentration，MIC）。从未见细菌生长的孔中取 20
          标仪（瑞士 Tecan 公司），E-1010 型离子溅射仪、S-3400N
                                                              μL液体涂于营养琼脂培养基上，于35 ℃培养18～24 h，
          型扫描电镜（日本Hitachi公司）。
                                                              肉眼观察培养基上受试菌的生长情况，若培养基上无细
          1.2 主要药品与试剂                                         菌生长，则该孔对应的浓度即为药物的最小杀菌浓度
              黄绵马酸BB由广东药科大学中药学院中药化学教                         （minimum bactericidal concentration，MBC）。每次实验
          研室提供，批号为 GC-CZ-1809010，纯度大于 98%；莫匹                  均使用金黄色葡萄球菌 ATCC29213 作为质控菌株，头
          罗星对照品（批号N0825A，纯度大于99%）、莫匹罗星软                       孢西丁作为质控药物，若测得头孢西丁的 MIC 范围为
          膏（批号18010176）均购自中美天津史克制药有限公司；                       1～4 μg/mL，则该方法可靠。以上操作重复 3 次，测定
          红霉素对照品（批号 M0726A，纯度大于 99%）购自大连                      结果用几何均值表示。


          ·2616·   China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 21                                 中国药房    2022年第33卷第21期
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