Page 36 - 《中国药房》2022年20期
P. 36

2.2 分组、造模与给药                                        2.7 大鼠胃组织病理形态学的观察
              将大鼠适应性饲养 1 周后，随机分为正常组、模型                            取“2.3”项下各组大鼠的胃组织适量，常规脱水、石
          组、阳性对照组（复方田七胃痛胶囊供试液 0.45 g/kg）、                     蜡包埋、切片，经苏木精-伊红（HE）染色后，于光学显微
          炮姜高剂量组（15.0 g/kg）、炮姜低剂量组（7.5 g/kg）、干                镜下观察各组胃组织的病理形态学变化并拍照，记录胃
          姜高剂量组（15.0 g/kg）、干姜低剂量组（7.5 g/kg），每组                黏膜糜烂灶数量：平均每个视野下糜烂灶数量＝切面内
          10 只，各给药组剂量参考预实验结果设置。除正常组                           糜烂灶数量/计数视野个数。利用 Olympus Cellsens
          外，其余各组参考相关文献            [10―11] 采用食醋联合无水乙醇          Dimension 软件测量糜烂灶面积：平均糜烂灶面积＝切
          灌胃法建立脾胃虚寒型胃溃疡大鼠模型。模型组和各
                                                              面内糜烂灶面积总和/切面内糜烂灶数量。
          给药组大鼠于每天上午灌胃4 ℃的食醋（10 mL/kg），连
                                                              2.8 大鼠肠道菌群的检测
          续 10 d，正常组灌胃等量水；第 5～10 天，各给药组大鼠
                                                                  取“2.3”项下正常组、模型组、干姜高剂量组（结果中
          每天下午灌胃相应药物，正常组、模型组大鼠灌胃水；第
                                                              简称“干姜组”）、炮姜高剂量组（结果中简称“炮姜组”）
          10 天给药结束后，所有大鼠均禁食不禁水；第 11 天，除
                                                              大鼠的粪便样品适量，委托北京诺禾致源科技股份有限
          正常组外，其余各组大鼠均灌胃无水乙醇（1 mL/只）。
                                                              公司进行 DNA 提取和 16S V3+V4 区扩增子信息采集、
          若大鼠精神萎靡，动作迟缓无力，背毛疏散无泽，渐见体
                                                              分析。基于Illumina Nova测序平台测序，构建PCR-free
          型瘦弱，大便溏泄且肛门附近出现污物，胃组织有溃疡，
                                                              文库，然后进行双末端测序。通过对reads拼接，按97%
          说明脾胃虚寒型胃溃疡模型复制成功                  [10―11] 。实验期间
                                                              的一致性将序列聚类成操作分类单元（operational taxo‐
          有动物死亡，故每组选用6只大鼠进行后续研究。
          2.3 样本采集与处理                                         nomic units，OTUs）。 结 合 Silva138 数 据 库 ，对 所 得
              灌胃无水乙醇1 h后，于大鼠股动脉取血，一部分静                        OTUs（共 4 060 个）序列进行物种注释。根据物种注释
          置后以 3 000 r/min 离心 15 min，取血清；另一部分置于                结果，进一步计算α多样性与β多样性，取不同分类水平
          含枸橼酸钠的试管内，以 3 000 r/min 离心 15 min，取血                上相对丰度排名前10位的物种进行分析，揭示各组大鼠
          浆。然后，剖取大鼠胃组织，置于 10% 甲醛溶液中浸泡                         粪便样本物种组成和群落结构的差异。
          20 min 后取出备用；取大鼠粪便，置于密封的无菌冻存                        2.9  统计学方法
          管内，于－80 ℃下冻存。                                           采用SPSS 26.0软件对数据进行统计分析。数据均
          2.4  大鼠血清中MTL、GAS、EGF含量的测定                          以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两
              采用 ELISA 法进行测定。取“2.3”项下各组大鼠的                    两比较采用LSD-t法检验。检验水准α＝0.05。
          血清适量，按相应试剂盒说明书操作，检测其 MTL、                           3 结果
          GAS、EGF含量。                                          3.1  大鼠血清中MTL、GAS、EGF含量的测定结果
          2.5  大鼠凝血4项的测定                                          与正常组比较，模型组大鼠血清中MTL、GAS、EGF
              采用凝固法进行测定。取“2.3”项下各组大鼠的血                        含量均显著降低（P＜0.05）；与模型组比较，阳性对照组
          浆适量，按相应试剂盒说明书操作，检测其 APTT、PT、
                                                              和炮姜高剂量组大鼠血清中MTL、GAS、EGF含量，干姜
          TT和FIB含量。
                                                              低、高剂量组 MTL、GAS 含量，以及炮姜低剂量组 EGF
          2.6  大鼠胃溃疡指数和溃疡抑制率的测定
                                                              含量均显著升高（P＜0.05）；与相同剂量干姜组比较，炮
              取“2.3”项下各组大鼠胃组织适量，沿胃大弯剪开，
                                                              姜低剂量组大鼠血清中MTL、GAS含量均显著降低，炮
          用生理盐水洗净胃内容物，观察黏膜面溃疡的形成情
                                                              姜低、高剂量组 EGF 含量均显著升高（P＜0.05）。结果
          况，用游标卡尺测量出血区域的长度和宽度，以相关标
                                                              见表2。
          准（表1）进行评分，所得总积分即为该动物的溃疡指数；
                                                              表2 各组大鼠血清中 MTL、GAS、EGF 含量的测定结
          同时，计算各组大鼠的溃疡抑制率。总积分＝出血点分
                                                                   果（x±s，n＝6）
          值+出血带长度分值+出血带宽度分值×2（因宽度所反
                                                              组别            MTL/（pg/mL）  GAS/（pg/mL）  EGF/（ng/mL）
          映损伤的严重程度强于长度，故双倍积分），溃疡抑制率                           正常组           302.79±53.15  293.18±40.84  24.69±5.74
         （%）＝（模型组溃疡指数－实验组溃疡指数）/模型组溃                           模型组           249.76±42.00 a  247.99±15.57 a  14.14±3.71 a
                                                              阳性对照组         334.98±75.25 b  326.42±29.84 b  29.35±2.85 b
                       [11]
          疡指数×100% 。
                                                              干姜低剂量组        314.17±42.43 b  304.06±20.74 b  16.74±5.64
                       表1 直观观察评分标准                            干姜高剂量组        324.00±68.39 b  311.57±46.34 b  17.34±4.35
           损伤情况         1分       2分        3分       4分        炮姜低剂量组        280.61±33.99 c  256.89±20.98 c  26.68±3.31 bc
           出血点          1个                                    炮姜高剂量组        328.26±39.31 b  298.56±39.61 b  28.47±2.91 bc
           出血带长度       1～5 mm   ＞5～10 mm  ＞10～15 mm  ＞15 mm      a：与正常组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与相同剂
           出血带宽度       1～2 mm    ＞2 mm                        量干姜组比较，P＜0.05


          ·2462·   China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 20                                 中国药房    2022年第33卷第20期
   31   32   33   34   35   36   37   38   39   40   41