Page 26 - 《中国药房》2022年19期
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2.5.5  精密度试验      取供试品溶液（5号），在516 nm波               mL量瓶中，加乙腈定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
          长处连续测定吸光度6次。结果显示，吸光度的RSD＝                           2.6.2  色 谱 条 件 与 系 统 适 用 性 试 验        色 谱 柱 为
          0.10%（n＝6），表明仪器精密度良好。                               ZORBAX Eclipse Plus C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；流
          2.5.6  稳定性试验      取同一供试品溶液（5 号），分别于                 动相为乙腈-0.05% 甲酸水溶液（70∶30，V/V）；流速为 1
          室温下放置 0、2、4、6、8 h 时在 516 nm 波长处测定吸光                 mL/min；检测波长为275 nm；柱温为30 ℃；进样量为10
          度。结果显示，吸光度的RSD＝0.17%（n＝5），表明供试                      μL。在此色谱条件下，取“2.6.1”项下混合对照品溶液和
          品溶液在室温下放置8 h内稳定。                                    供试品溶液进样测定，记录峰面积。结果显示，2种待测
          2.5.7  重复性试验      取蓝蓟滇紫草样品（5号），共6份，                 成分色谱峰的分离度均大于 1.5，理论板数均不低于
          分别按“2.5.2”项下方法制备供试品溶液，在516 nm波长                     2 000，空白对照无干扰（图略），详见图4。
          处测定吸光度，以吸光度计算样品含量。结果显示，样                                      45    1               2
          品中左旋紫草素的平均含量为2.19%，RSD＝0.53%（n＝                               35
          6），表明该方法重复性良好。                                                25
          2.5.8  加样回收率试验         分别称取同一已知左旋紫草                         mAU  15
          素含量的蓝蓟滇紫草药材样品（5号）粉末约0.25 g，共6                                 5
          份，精密称定，精密加入相应量的左旋紫草素对照品，按                                    －5
                                                                         0   5  10  15  20  25  30  35  40
         “2.5.2”项下方法制备供试品溶液，在516 nm波长处测定                                              t/min
                                                                                  A.混合对照品溶液
          吸光度，计算加样回收率。结果显示，平均加样回收率为                                     55
          99.20%，RSD＝1.30%（n＝6），表明该方法准确度良好。                             45                   2
          2.5.9  羟基萘醌总色素的含量测定             取16批药材样品，                     35
          分别按“2.5.2”项下方法制备供试品溶液，在516 nm波长                             mAU  25
                                                                        15
          处测定吸光度，以吸光度计算样品中羟基萘醌总色素的                                      5     1
          含量，重复测定3次，取平均值。结果显示，以左旋紫草                                    －5
                                                                         0   5  10  15  20  25  30  35  40
          素计，1～16 号蓝蓟滇紫草药材样品中羟基萘醌总色素                                                  t/min
                                                                                  B.供试品溶液（5号）
          的 含 量 分 别 为 0.99%、2.31%、0.93%、7.51%、2.19%、
                                                                 1：左旋紫草素；2：β，β′-二甲基异丙酰阿卡宁
          0.88%、1.18%、1.99%、0.56%、2.70%、1.50%、5.38%、             图4 混合对照品溶液和供试品溶液的HPLC图
          2.73%、1.17%、1.36%、2.71%，平均含量为 2.25%。以不
                                                              2.6.3  线性关系考察       精密吸取“2.6.1”项下2种对照品
          合格率低于样本量的20%设限，加之2020年版《中国药
                                                              贮备液各0.02、0.1、0.5、1.0、2.0 mL，分别置于5个10 mL
          典》（一部）规定紫草药材中羟基萘醌总色素含量不得少
                                                              量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得各系列浓度的混
          于 0.80%，故本研究建议蓝蓟滇紫草药材中羟基萘醌总
                                                              合对照品溶液；再按“2.6.2”项下色谱条件进样测定，记
          色素的含量不得少于0.80%。
          2.6  HPLC法测定左旋紫草素和β，β′-二甲基丙烯酰阿                      录峰面积。以各对照品质量浓度（X）为横坐标、峰面积
          卡宁含量                                               （Y）为纵坐标进行线性回归，得左旋紫草素的回归方程
              参考文献[12―13]操作。                                  为 Y＝15.721 2X—2.371 6（r＝0.999 9），线 性 范 围 为
          2.6.1  溶液的制备 （1）混合对照品溶液：取左旋紫草                       2.240～224.0 μg/mL；β，β′-二甲基异丙酰阿卡宁的回归
          素、β，β′-二甲基丙烯酰阿卡宁对照品各约 10 mg，精密                      方程为Y＝11.607 5X－4.468 4（r＝0.999 9），线性范围为
          称定，分别置10 mL量瓶中，用乙腈溶解并定容，即得左                         2.320～232.0 μg/mL。
          旋紫草素质量浓度为 1.12 mg/mL、β，β′-二甲基丙烯酰                    2.6.4  精密度试验      精密吸取同一混合对照品溶液 10
          阿卡宁质量浓度为 1.16 mg/mL 的单一成分对照品贮备                      μL，按“2.6.2”项下色谱条件连续进样测定 6 次，记录峰
          液。分别取 2 种对照品贮备液 200 μL、1 mL，置于同一                    面积。结果显示，左旋紫草素和 β，β′-二甲基丙烯酰阿
          个10 mL量瓶中，加乙腈配制成左旋紫草素质量浓度为                          卡宁峰面积的RSD分别为0.18%、0.18%（n＝6），表明仪
          22.4 μg/mL、β，β′-二甲基丙烯酰阿卡宁质量浓度为 116                  器精密度良好。
          μg/mL的混合对照品溶液。（2）供试品溶液：取药材样品                        2.6.5  重复性试验      精密称取同一批蓝蓟滇紫草药材
          粉末（过四号筛）约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精                       样品（5号）粉末，共6份，分别按“2.6.1”项下方法制备供
          密加入石油醚（60～90 ℃）25 mL，称定质量，超声处理                      试品溶液，按“2.6.2”项下色谱条件进样测定，记录峰面
         （功率250 W，频率33 kHz）30 min，放冷，再次称定质量，                  积，以外标法计算样品含量。结果显示，左旋紫草素、
          用石油醚（60～90 ℃）补足减失的质量，摇匀，滤过；精密                       β，β′-二甲基丙烯酰阿卡宁含量的 RSD 分别为 2.86%、
          量取续滤液 10 mL，蒸干，残渣加乙腈溶解并转移至 10                       2.92%（n＝6），表明该方法重复性良好。


          ·2324·   China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 19                                 中国药房    2022年第33卷第19期
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