Page 53 - 《中国药房》2022年10期

0.05）. CONCLUSIONS TPE can improve the learning and memory impairment induced by scopolamine in mice，and the
mechanism may be related to balancing the brain cholinergic system，alleviating oxidative stress injury，improving inflammatory
response，and inhibiting the overexpression of p-Tau，BACE1 and APP.
KEYWORDS Tiarella polyphylla ethanol extract；learning and memory impairment；acetylcholinesterase；scopolamine；mice

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）是一种发 伊红染色液（批号 G1002）、苏木精染色液（批号
生于中枢神经的进行性退行性疾病，其临床主要表现为 G1004）均购自武汉赛维尔生物科技有限公司；氢溴酸东
记忆障碍、失语、失认、视空间功能受损、行为改变等。 莨菪碱（批号 M1112A，纯度＞98％）、盐酸多奈哌齐（阳
目前，AD的发病机制尚未阐明，主要包括胆碱能损伤假 性对照药物，批号 D0918A，纯度＞98％）均购自大连美

说、氧化应激损伤假说、β淀粉样蛋白（amyloid β-protein， 仑生物技术有限公司；微板法测定超氧化物歧化酶（su-
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Aβ）毒性假说、Tau 蛋白假说等 。临床治疗 AD 的首选 peroxide dismutase，SOD）试剂盒和比色法测定丙二醛
药物主要是针对胆碱能损伤的乙酰胆碱酯酶（acetylcho- （malondialdehyde，MDA）、AChE 试剂盒（批号分别为
linesterase，AChE）抑制剂，包括卡巴拉汀、多奈哌齐、石 20210708、20201230、20210519）均购自南京建成生物工
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杉碱甲等 。由此可见，AChE抑制剂仍是治疗AD的有 程研究所；乙酰胆碱转移酶（choline acetyltransferase，
效药物。但上述药物有不同的副作用，例如卡巴拉汀会 ChAT）酶联免疫吸附测定试剂盒（批号 2021061541M）
引起神经系统异常、精神障碍、肝功能异常等 ；多奈哌 购自上海泛柯实业有限公司；白细胞介素6（interleukin-6，
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齐会引起头晕、失眠、呕吐、食欲不振、腹泻等 ；石杉碱 IL-6）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）
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甲可引发头晕、恶心、食欲缺乏、腹痛等 。因此，寻找安 酶联免疫吸附测定试剂盒（批号分别为 L210413814、
全、有效、副作用较小的药物很有必要。 L210423372）均购自武汉云克隆科技股份有限公司；兔
黄水枝 Tiarella polyphylla D. Don 是虎耳草科黄水 源磷酸化 Tau 蛋白（phosphorycated Tau protein，p-Tau）、
枝属植物，以全草入药，具有清热解毒、活血祛瘀、消肿 β淀粉样前体蛋白裂解酶 1（β-site amyloid precursor pro-
止痛的作用，用于临床治疗痈疖肿毒、跌打损伤、肝炎、 tein cleaving enzyme 1，BACE1）、淀粉样前体蛋白（amy-
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咳嗽气喘等 。本课题组前期预实验发现，黄水枝醇提 loid precursor protein，APP）单克隆抗体（批号分别为
物（T. polyphylla ethanol extract，以 下 简 称“TPE”）对 4000001573、4000000696、4000000465）均购自武汉爱博
AChE有较强的抑制活性；另有研究表明，黄水枝甲醇提 泰克生物科技有限公司；兔源甘油醛-3-磷酸脱氢酶
取物对血浆胆碱酶具有较强的抑制活性 ，但其是否影 （glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）单
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响学习记忆能力尚未见报道。为此，本研究采用腹腔注 克隆抗体（批号22w8364）购自美国Affinity公司；辣根过
射东莨菪碱建立学习记忆障碍小鼠模型，观察TPE对其 氧化物酶标记的山羊抗兔免疫球蛋白 G（immunoglobu-
学习记忆能力的影响，并初步探讨可能的作用机制，旨 lin G，IgG）二抗（批号G201217）购自杭州华远生物技术
在为进一步推动黄水枝的开发利用提供理论依据。 有限公司；其余试剂均为分析纯或化学纯，水为纯净水。
1 材料 1.3 实验动物

1.1 主要仪器 SPF 级雄性昆明小鼠 60 只，体质量为（20±2）g，由
本研究所用主要仪器包括 ELX800 型酶标仪（成都 贵州医科大学动物实验中心提供，动物生产许可证号为
锦世昌祥科技有限公司）、TGL16M型医用离心机（湖南 SCXK（黔）2018-0001。实验期间，所有小鼠均在光照
凯达科学仪器有限公司）、DYY-6C 型电泳系统（北京六 12 h/黑暗 12 h、温度 18～22 ℃、相对湿度50％～60％条
一生物科技有限公司）、WMT-100S 型 Morris 水迷宫系 件下饲养并自由摄食、饮水，适应性饲养1周后用于正式
统（四川成都泰盟科技有限公司）、MF53 型光学显微镜 实验。本实验方案经贵州医科大学动物伦理委员会审
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（广州市明美光电技术有限公司）、Tanon-5200型数码凝 核批准（批准号1711020），严格遵循相关准则操作 。
胶图像分析系统（上海天能科技有限公司）等。 2 方法

1.2 主要药材与试剂 2.1 TPE制备
黄水枝药材（干品，采于 2020 年 11 月）由昆明采智 取黄水枝药材（干品）适量，以 10 倍量的 75％乙醇
生物技术有限公司提供，经贵州医科大学龙庆德副教授 回流提取 1 h×3 次，合并 3 次提取液，减压浓缩，冷冻
鉴定为真品。 干燥后得到 TPE（提取率为 17％，每 1 g 相当于生药

中国药房 2022年第33卷第10期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 10 ·1199 ·