Page 38 - 《中国药房》2022年10期
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急性心肌梗死所致心力衰竭为临床常见疾病 。近                          9.5 g）由山东步长制药集团提供；福辛普利钠片（阳性对
                                                   [1]
        年来，冠心病的发病率急剧上升，心力衰竭是ST段抬高                           照药，批号 ABS6325，规格10 mg/片）购自中美上海施贵
        心肌梗死患者接受直接经皮冠状动脉介入治疗后住院                             宝制药有限公司；苏木精-伊红（hematoxylin and eosin，
                               [2]
        死亡的重要独立预测因子 。虽然，随着药物洗脱支架                            HE）染色试剂盒（货号G1120）、BCA蛋白浓度测定试剂
        的出现和经皮机械循环支持设备的改进，急性心肌梗死                            盒（货号 PC0020）均购自北京索莱宝科技有限公司；活
        的病死率大幅下降，但急性心肌梗死后心力衰竭的发生                            性氧（reactive oxygen species，ROS）检测试剂盒（货号
                   [3]
        率仍然很高 。据美国心脏协会预测，到 2030 年，全球                        S0033S）、细胞总抗氧化能力（total antioxidant capacity，
                                                 [4]
        将有超过 800 万成年人受到心力衰竭的困扰 。近年                          T-AOC）检测试剂盒（货号S0121）、还原型烟酰胺腺嘌呤
        来，心力衰竭的一系列治疗方法虽取得了一定进展，但                            二核苷酸磷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleo-
        患者预后仍不理想。因此，有必要进一步阐明心力衰竭                            tide phosphate，NADPH）检测试剂盒（货号 S0179）、胰酶
        的发病机制，寻找新的治疗靶点。                                     消化液（货号C0201）均购自上海碧云天生物技术有限公
            线粒体是心肌细胞能量代谢的主要部位，因此保证                          司；JC-1线粒体膜电位检测试剂盒（货号T4069）、兔抗大
                             [5]
        其数量和质量尤为重要 。有研究指出，线粒体自噬对                            鼠β-肌动蛋白（β-actin）单克隆抗体（货号 ABT264）均购
        线粒体的质量控制发挥着重要作用 。在生理或病理应                            自美国 Sigma 公司；戊巴比妥钠（批号 57330）购自天津
                                       [6]
        激反应中，线粒体自噬可通过清除心脏中破碎的线粒体
                                                            市恒兴化学试剂制造有限公司；兔抗大鼠PINK1单克隆
        来维持健康的线粒体网络；一旦线粒体自噬功能受损，
                                                            抗体（货号 ab216144）、兔抗大鼠 Parkin 单克隆抗体（货
        破碎的线粒体过度堆积就会导致心脏损伤，从而可引发
                                                            号ab77924）、兔抗大鼠P62单克隆抗体（货号ab240635）
        心肌细胞死亡和心力衰竭 。参附益心颗粒是在临床治
                               [7]
                                                            均购自英国Abcam公司；辣根过氧化物酶标记的山羊抗
        疗心力衰竭方面具有优势的中成药 。前期研究显示，
                                       [8]
                                                            兔免疫球蛋白G（IgG）二抗（货号7074P2）购自美国Cell
        该药能改善急性心肌梗死后心力衰竭大鼠的心脏功能，
                                                            Signaling Technology公司；其余试剂均为实验室常用规
        减轻其心肌纤维化程度，对心室重构有抑制作用，具有
                                                            格，水为蒸馏水。
        抗心力衰竭的效果         [9－10] 。但是，参附益心颗粒的抗心力
                                                            1.3  实验动物
        衰竭作用是否与线粒体自噬有关尚不清楚。PTEN诱导
                                                                SPF 级成年雄性 SD 大鼠（体质量 180～220 g）购自
        激酶 1（PTEN-induced putative kinase 1，PINK1）/E3 泛素
                                                            郑州市惠济区华兴实验动物养殖场，动物生产许可证号
                                               [11]
        连接酶 Parkin 通路是线粒体自噬的经典通路 ，本研究
                                                            为 SCXK（豫）2019-0002。所有大鼠均饲养于 SPF 级环
        选择参附益心颗粒作为干预药物，以急性心肌梗死后心
                                                            境中。动物实验方案经河南中医药大学第一附属医院
        力衰竭大鼠为对象，通过检测其血流动力学指标、心肌
                                                            实验动物福利伦理审查委员会批准，批件号为 YFY-
        组织病理学指标、心肌细胞氧化应激水平、心肌细胞线
                                                            DW2020019。
        粒体膜电位和心肌组织中PINK1、Parkin、泛素结合蛋白
                                                            2 方法
        P62 的表达水平，探讨参附益心颗粒对急性心肌梗死后
        心力衰竭大鼠心肌细胞线粒体自噬功能的影响，以期为                            2.1  分组、造模与给药
        阐明急性心肌梗死后心力衰竭的发病机制提供依据和                                 采用结扎左冠状动脉前降支的方法建立急性心
        新的方向。                                               肌梗死后心力衰竭大鼠模型。用 2％戊巴比妥钠（50
        1 材料                                                mg/kg）腹腔注射麻醉大鼠后，备皮、消毒，行气管插管，
        1.1  主要仪器                                           外接小动物简易呼吸机，待其呼吸平稳后，在左侧胸部
            本研究所用主要仪器有TKR-200C型小动物简易呼                       从右下至左上做一斜行切口，逐层分离胸肌后，在第 4
        吸机（美国 Harvard Apparatus 公司），SpectraMax M3 型         肋间以手术刀沿下位肋骨上缘切开肋间肌进入胸腔，扩
        荧光酶标仪（美国 Molecular Devices 公司），PowerPac             大第4、5肋间隙并固定后用镊子撕开心包，将心脏轻挤
        HC 型蛋白电泳与转膜装置（美国 Bio-Rad 公司），Image                  出后，在左心耳与肺动脉圆锥之间平左心耳下缘 1 mm
        ScannerⅢ型灰度扫描仪（美国GE公司），PowerLab型生                   处迅速结扎左冠状动脉前降支近端，同时观察心电图变
        理记录仪（上海然哲仪器设备有限公司），Multifuge X1R                    化，术后立即关闭胸腔并用注射器抽出胸腔内气体，以
        型离心机（美国 Thermo Fisher Scientific 公司），RCO-           恢复胸腔负压，将肌肉层和皮肤分别缝合。术后经心脏
        3000TVBB型二氧化碳（CO2 ）培养箱（美国Revco公司），                  超声检查，若大鼠左室射血分数（left ventricular ejection
                                                                                              [12]
        DMI 3006型激光共聚焦显微镜（德国Leica公司），KZ-Ⅱ                   fraction，LVEF）＜50％，则判定造模成功 。将造模成功
        型研磨器（武汉赛维尔生物科技有限公司）等。                               的大鼠分为模型组、参附益心颗粒低剂量组（1.76 g/kg）、
        1.2  主要药品与试剂                                        参附益心颗粒高剂量组（8.8 g/kg）、福辛普利钠片组
            参附益心颗粒（批号 131101，1 g 相当于生药总量                   （4 mg/kg），另设假手术组（大鼠相同位置只穿线不结


        ·1184 ·  China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 10                                 中国药房    2022年第33卷第10期
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