Page 33 - 《中国药房》2022年10期
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得小鼠每日盐酸氟西汀灌胃量为0.02 g/kg。                           mg/kg 皮下注射盐酸育亨宾（生理盐水溶解），记录各组
            取140只小鼠，随机分为14组，每组10只，分别为空                     小鼠24 h内的死亡情况。
        白对照组、30％CCTE组（0.25、0.50、1.00 g/kg）、50％CCTE         2.5 CCTE中多酚类物质对MAO的活性抑制实验
                                                                                          [18]
        组（0.25、0.50、1.00 g/kg）、70％CCTE 组（0.125、0.25、       2.5.1 MAO 制备      参考 Youdim 等 的方法并稍作修
        0.50 g/kg）、90％CCTE组（0.125、0.25、0.50 g/kg）、盐酸氟      改：将小鼠处死，迅速于冰上取出小鼠大脑，将脑组织和
        西汀组（0.02 g/kg）。空白对照组给予0.50％羧甲基纤维                   0.30 mol/L蔗糖溶液按1 ∶ 35（g/mL）的比例制成匀浆，于
        素钠溶液，其余各组分别给予相应药物，连续给药 7 d，                        4 ℃条件下离心10 min（1 500 r/min），分离上清液，沉淀
        每天给药1次。末次给药30 min后，考察小鼠悬尾实验                        备用；将上清液于4 ℃条件下离心30 min（10 000 r/min），
        和强迫游泳实验中的静止不动时间。                                   弃去上清液，沉淀备用。将前后 2 个沉淀分别用 0.30
        2.1.3  悬尾实验     参考文献[16]，将各组小鼠固定于 25               mol/L 蔗糖溶液（每克脑组织加 0.30 mol/L 蔗糖溶液
        cm×25 cm×35 cm、内壁四周为黑色的箱子中，且小鼠头                    0.80 mL）混悬，合并，再加入 1.20 mol/L 蔗糖溶液（每克
        部与箱子底面保持5 cm的距离，检测时长共6 min，记录                      脑组织加1.20 mol/L蔗糖溶液8.00 mL），混匀，于4 ℃条
        后 5 min 内小鼠的累计静止不动时间。以小鼠暂停挣                        件下离心 40 min（10 500 r/min）；弃去上清液，向沉淀中
        扎，全身呈垂直倒悬的静止状态为静止不动的判定标准。                          加入 pH7.4 的 50.00 mmol/L 磷酸盐缓冲液（每克脑组织
        2.1.4  强迫游泳实验       参考文献[16]，将各组小鼠放置               加 50.00 mmol/L 磷酸盐缓冲液 0.40 mL），混匀，于 4 ℃
        于高度 25 cm、直径 10 cm、水深 15 cm、水温（23±2）℃              条件下离心 40 min（10 500 r/min）；弃去上清液，向沉淀
        的透明玻璃水缸中，检测时长共 6 min，记录后 5 min 内                   中加入 pH7.4 的 50.00 mmol/L 磷酸盐缓冲液（每克脑组
        小鼠的累计静止不动时间。以小鼠在水面暂停挣扎，出                           织加 50.00 mmol/L 磷酸盐缓冲液 0.40 mL），混悬，即得
        现漂浮的平衡状态为静止不动的判定标准。                                MAO溶液，分装后于－80 ℃储存备用。
        2.2  5-HTP诱导的小鼠甩头实验                                2.5.2  酶活性抑制实验          取 MAO 溶液 10 µL（以 1.50
            参考文献[16]，将80只小鼠随机分为8组（组别设置                     mg/mL 蛋白浓度计）置于 1.5 mL 离心管中，再加磷酸盐
        参考“2.1”项下结果）：空白对照组、盐酸氟西汀组（0.02                     缓冲液适量（10.00 mmol/L，pH7.0），混匀，于 37 ℃恒温
        g/kg）、50％CCTE 组（0.25、0.50、1.00 g/kg）、70％CCTE       培养箱中预孵育 10 min，然后加 2 µL 5-HT 溶液（2.00
        组（0.25、0.50、1.00 g/kg），每组 10 只。各组小鼠每天给             mmol/L，以水溶解）和 10 µL 受试药物溶液（0.10、1.00、
        药1次，连续14 d。各组小鼠在末次给药前45 min按75                     10.00、25.00、50.00、100.00 µmol/L，各受试药物以甲醇溶
        mg/kg腹腔注射帕吉林（生理盐水溶解）；末次给药后45                       解，再以50％甲醇稀释至所需浓度），再加磷酸盐缓冲液
        min，按 10 mg/kg 腹腔注射 5-HTP（生理盐水溶解），15               （10.00 mmol/L，pH7.0）使反应体系终体积为 100 µL，于
        min 后观察其甩头次数。检测时长共 6 min，记录后 5                     37 ℃孵育60 min。取MAO溶液，除不加底物5-HT溶液
        min内每只小鼠的甩头总次数。以小鼠快速摇头而躯体                          外，其余按上述方法在同样条件下孵育，作为各受试药
        未随之转动为评价指标。                                        物的对照。另设1组，除不加MAO溶液外，其余按上述
        2.3  小鼠利血平拮抗实验                                     方法在同样条件下孵育，作为加 5-HT 溶液时各受试药
            参考文献[16]，将90只小鼠随机分为9组（组别设置                     物的对照。另取加热失活（90 ℃，30 min）的MAO溶液，
        参考“2.1”项下结果）：空白对照组、模型组、盐酸丙咪                        按上述方法在同样条件下与 5-HT 溶液共同孵育作为
        嗪组（0.02 g/kg）、50％CCTE 组（0.25、0.50、1.00 g/kg）、      MAO 酶溶液与 5-HT 溶液完全反应的对照。受试药物
        70％CCTE组（0.25、0.50、1.00 g/kg），每组10只。各组小            有帕吉林（阳性抑制剂）、CCT-1、CCT-2、CCT-3、CCT-4、
        鼠每天给药 1 次，连续 7 d。各组小鼠在末次给药 1 h 后                   CCT-5、CCT-6、CCT-7、CCT-8、CCT-9、CCT-10、CCT-11，
        按4 mg/kg腹腔注射盐酸利血平（生理盐水溶解），1 h后                     每组平行3份。
        分别记录其眼睑下垂评分和运动不能情况，4 h 后检测                         2.5.3  样品处理      取“2.5.2”项下方法所得反应溶液，立
        小鼠肛温。                                              即加冰冷的乙腈200 μL终止反应，在多管漩涡混合仪中
        2.4 小鼠育亨宾毒性增强实验                                    涡旋 5 min 后，离心 10 min（13 000 r/min），取上清液进
            参考文献[17]，将80只小鼠随机分为8组（组别设置                     样，采用高效液相色谱法测定产物峰面积。
        参考“2.1”项下结果）：空白对照组、盐酸丙咪嗪组（0.02                     2.5.4  色谱条件      参考文献[19]方法并稍作修改：以
        g/kg）、50％CCTE 组（0.25、0.50、1.00 g/kg）、70％CCTE       Agilent SB-AQ C18 （150 mm×4.60 mm，5 μm）为色谱柱，
        组（0.25、0.50、1.00 g/kg），每组 10 只。各组小鼠每天给             以水（A）-乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱（0～3.00 min，
        药 1 次，连续 7 d。各组小鼠在末次给药 30 min 后按 35                10％B；3.00～3.10 min，10％B→50％B；3.10～5.00 min，


        中国药房    2022年第33卷第10期                                            China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 10  ·1179 ·
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