Page 32 - 《中国药房》2022年10期
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醇提取物具有抗抑郁作用，因此本研究拟采用小鼠悬尾                            E1814115）、帕 吉 林（批 号 L1518016）、5-HTP（批 号
        实验和强迫游泳实验来考察雪菊 75％乙醇提取物的                            H1815003）、盐酸育亨宾（批号D18405）、盐酸氟西汀（批
        30％、50％、70％、90％乙醇洗脱部位（ethanol elution               号 C101874）、盐酸丙咪嗪（批号 171101）均购自上海阿
        from the C. tinctoria Nutt. extract，CCTE）的抗抑郁作用，    拉丁生化科技股份有限公司，纯度均大于 99％；肝素钠
        筛选雪菊抗抑郁活性的有效部位。                                     注射液（批号 510108，规格 2 mL∶ 12 500 单位）由新疆医
            经典的“单胺类神经递质假说”认为，脑中5-羟色胺                        科大学第一附属医院提供，生产厂家为上海上药第一生
        （5-hydroxytryptamine，5-HT）、去 甲 肾 上 腺 素（norepi-      化药业有限公司；AB-8型大孔吸附树脂（粒度0.3～1.25
        nephrine，NE）等单胺类神经递质浓度下降是导致抑郁                       mm，批号 HG2-885-76）购自天津市光复精细化工研究
                          [12]
        症发生的直接原因 。因此，本文将采用 5-羟色氨酸                           所；蔗糖（批号20201009）、磷酸氢二钠（批号20201009）、
        （5-hydroxytryptophane，5-HTP）诱导的小鼠甩头实验、利             磷酸二氢钠（批号 20160706）均购自天津市鑫铂特化工
        血平拮抗实验和育亨宾毒性增强实验探究雪菊抗抑郁                             有限公司；甲醇（批号 20201008）、乙腈（批号 20210329）
        有效部位的作用是否与单胺类神经系统功能相关。研                             均购自福晨（天津）化学试剂有限公司。
        究还发现，神经元突触间隙中的5-HT、NE易被单胺氧化
                                                            1.3 实验动物
        酶（monoamine oxidase，MAO）降解失活，从而诱发抑郁
                                                                清洁级雄性 ICR 小鼠，体质量为（20±2）g，购于新
                   [14]
        症 。Ma等 在雪菊提取物中分离鉴定出11个多酚类
          [13]
                                                            疆医科大学动物实验中心，动物生产许可证号为SCXK-
        物质（编号CCT-1～CCT-11），包括马里苷（CCT-1）、异奥
                                                           （新）2021-0015。
        卡 宁 -7-O-β-D- 吡 喃 葡 萄 糖 苷（CCT-2）、花 旗 松 素 -7-
                                                            2 方法
        O-β-D-吡喃葡萄糖苷（CCT-3）、栎草亭-7-O-β-D-吡喃葡
                                                            2.1  雪菊抗抑郁有效部位的筛选
        萄糖苷（CCT-4）、5，7，3′，5′-四羟基二氢黄酮-7-O-β-D-吡
                                                            2.1.1  雪菊 75％乙醇提取物及各 CCTE 的制备              取干
        喃葡萄糖苷（CCT-5）、奥卡宁（CCT-6）、异奥卡宁（CCT-7）、
                                                            燥的雪菊药材，50 ℃下干燥2 h，粉碎，按20倍量（mL/g）
        花旗松素（CCT-8）、绿原酸（CCT-9）、3，5-二咖啡酰奎宁
                                                            加入 75％乙醇，在（25±2）℃下浸泡 2 h 后，超声（功率
        酸（CCT-10）和 4，5-二咖啡酰奎宁酸（CCT-11）。为了进
                                                            250 W，频率 40 kHz，下同）提取 40 min；纱布过滤，滤渣
        一步探究雪菊抗抑郁作用是否与抑制 MAO 从而保护
                                                            以雪菊原药材的 15 倍量（mL/g）加入 75％乙醇超声提
        5-HT、NE等单胺类神经递质不被降解有关，本研究拟采
                                                            取，重复提取2次；纱布过滤，合并3次滤液，浓缩，干燥，
        用体外酶抑制实验考察上述 11 个多酚类物质对 MAO
                                                            即得雪菊 75％乙醇提取物，得率为 34.60％（以生药量
        的抑制作用，以期为雪菊抗抑郁作用机制和药效物质基
                                                            计）。将雪菊 75％乙醇提取物上样至 AB-8 型大孔吸附
        础的进一步阐明提供数据参考。
                                                            树脂，用30％、50％、70％、90％乙醇依次洗脱，即得不同
        1 材料
                                                            体积分数的乙醇洗脱液；将各乙醇洗脱液浓缩，冷冻干
        1.1  主要仪器
                                                            燥，即得雪菊 75％乙醇提取物的 30％、50％、70％、90％
            本研究所用主要仪器包括 LC20AB 型高效液相色
                                                            CCTE，得率分别为16.40％、5.75％、0.80％、0.28％（以生
        谱仪（日本Shimadzu公司），TG16-W型高速台式冷冻离
        心机（四川蜀科仪器有限公司），Alphal-LDplus型冷冻干                    药量计）。
        燥机（北京五洲东方科技发展有限公司），ZWY-200D型                        2.1.2  动物分组及给药        根据雪菊的不同用途，成人每
        恒温培养振荡器（上海智诚分析仪器制造有限公司），                            日用量以雪菊药材计为每 50 kg 体质量 2～20 g。本实
        RE-500 型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂），xMark                TM    验将成人每日最高用量与小鼠剂量进行换算，再经
        型酶标仪[伯乐生命医学产品（上海）有限公司]，EL202                       “2.1.1”项下得率换算后将小鼠30％CCTE和50％CCTE
        型电子天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]，                           低、中、高剂量确定为0.25、0.50、1.00 g/kg（以生药量计）；
        KQ-250DE 型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限                        考虑到 70％CCTE 和 90％CCTE 极性弱于 30％CCTE
        公司），MTV-100型多管漩涡混合仪（杭州奥盛仪器有限                        和 50％CCTE，可能会更容易透过血脑屏障而发挥中枢
                                                                         [15]
        公司）等。                                               神经药理作用 ，故将 70％CCTE 和 90％CCTE 低、中、
        1.2 主要药品与试剂                                         高剂量在 30％CCTE 和 50％CCTE 剂量上依次递减一
            雪菊药材购于新疆乌鲁木齐市北园春批发市场，产                          半，确定为 0.125、0.25、0.50 g/kg（以生药量计）。4 个洗
        自和田墨玉县，由新疆博州食品药品检验所吴继周副研                            脱部位在各自设定的给药剂量下进行抗抑郁作用有效
        究员鉴定为菊科金鸡菊属多年生草本植物两色金鸡菊                             部位的筛选。阳性药盐酸氟西汀临床服用剂量为 20～
        C. tinctoria Nutt.的干燥头状花序。盐酸利血平（批号                  60 mg/d，本实验将成人每日用量与小鼠剂量进行换算，


        ·1178 ·  China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 10                                 中国药房    2022年第33卷第10期
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