Page 20 - 《中国药房》2022年10期
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山慈菇为兰科植物杜鹃兰 Cremastra appendiculata             的干燥假鳞茎。
        （D. Don）Makino、独蒜兰Pleione bulbocodioides（Franch.）   2 方法与结果
        Rolfe 或云南独蒜兰 Pleione yunnanensis Rolfe 的干燥假         2.1 色谱条件
        鳞茎，前者习称“毛慈菇”，后两者习称“冰球子”。该药                              以 Hyperdil GOLD（100 mm×2.1 mm，1.9 μm）为色
                                                 [1]
        主要分布于我国贵州、云南、山西、陕西等地，为我国濒                           谱柱，以 0.1％甲酸溶液（A）-0.1％甲酸乙腈溶液（B）为
                   [2]
        危药用植物 。山慈菇归肝、脾经，具有清热解毒、化痰                           流 动 相 进 行 梯 度 洗 脱（0～4 min，2％ B→5％ B；4～8
                   [1]
        散结的功效 ，以山慈菇为主要药材的多种中药复方制                            min，5％B→12％B；8～11 min，12％B→20％B；11～16
                             [3]
        剂（如菊藻丸）疗效显著 。目前，山慈菇的基础研究多                           min，20％B→22％B；16～22 min，22％B→28％B；22～
        集中在杜鹃兰化学成分的分离鉴定及综述报道                      [4－5] ，而  30 min，28％ B→35％ B；30～33 min，35％ B→65％ B；
        关于云南独蒜兰的研究较少。山慈菇作为2020年版《中                          33～36 min，65％B→95％B；36～39 min，95％B→40％B；
        国药典》（一部）收录品种之一，仅有“性状”和“鉴别”                          39～40 min，40％B→2％B；40～43 min，2％B）；流速为
          [1]
        项 ，缺乏有效的质量控制标准，加之山慈菇基原多样，                           0.3 mL/min；柱温为40 ℃；进样量为2 µL。
                                 [6]
        导致市面上山慈菇伪品不断 。因此，明确山慈菇化学                            2.2 质谱条件
        成分，不仅有助于阐明其药效物质基础，还可用于药材                                离子源为电喷雾离子源；喷雾电压为 3 500 V；鞘气
        基原的确定。                                              流速为 40 arb；辅助气压力为 10 arb；雾化气温度为
            近年来，超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高                         350 ℃ ；扫 描 范 围 为 m/z 100～1 500；毛 细 管 温 度 为
        分辨质谱联用（UPLC-Q-Exactive-Plus-Orbitrap-MS）技           320 ℃；探头加热器温度为350 ℃；离子透镜电压频率为
        术被广泛应用于蛋白组学和中药复方、成分的分析，具                            50.0；碰撞能梯度为 20、40、60 eV；扫描模式为全扫描+
        有分离效率高、扫描速度快、分辨率高、灵敏度高等特                            数据依赖二级扫描的正负离子交换模式；一级分辨率为
        点 。基于此，本研究拟采用 UPLC-Q-Exactive-Plus-                 70 000；二级分辨率为17 500。
           [7]
        Orbitrap-MS 技术对山慈菇（基原为云南独蒜兰）的主要                     2.3  供试品溶液的制备
        成分进行分析，旨在为阐明其化学成分、挖掘药效物质                                取山慈菇饮片适量，粉碎，过 40 目筛。精密称取上
        基础及建立质量标准提供参考。                                      述粉末 1 g，加入 80％甲醇 25 mL，称定质量，超声（功率
        1 材料                                                500 W，频率40 kHz，下同）处理30 min，冷却至室温，再次
        1.1  主要仪器                                           称定质量，用80％甲醇补足减失的质量，滤过，以12 000
            本研究所用主要仪器有 Vanquish 型 UPLC 系统、Q                 r/min 离心 5 min，取上清液，即得质量浓度为 40 mg/mL
        Exactive Plus型高分辨质谱仪及配套的中药成分高分辨                    （以生药量计）的供试品溶液。
        质谱本地数据库 OTCML（美国 Thermo Fisher Scientific           2.4  对照品溶液的制备
        公司），FW100型高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有                             精密称取天麻素、山药素Ⅲ、dactylorhin A、鸟苷、腺
        限公司），EL-104 型电子分析天平[梅特勒-托利多仪器                       苷、loroglossin、militarine 对照品适量，分别置于 5 mL 量
        （上海）有限公司]，Allegra X-30R Centrifuge 型离心机             瓶中，加甲醇超声溶解后再用甲醇定容，制得质量浓度
        （美国Beckman Coulter公司），KQ-300DE型数控超声波                均为 20 μg/mL 的单一对照品溶液，置于－20 ℃冰箱中
        清洗器（昆山市超声仪器有限公司）等。                                  保存，备用。
        1.2  药品与试剂                                          2.5  数据处理
            天麻素对照品（批号 110807-202010，纯度≥98％）                     采用 Compound Discoverer 3.1 软件分析山慈菇的
        购自中国食品药品检定研究院；山药素Ⅲ、militarine、                      UPLC-MS/MS数据，将所得到的质谱信息（保留时间、一
        dactylorhin A 对 照 品（ 批 号 分 别 为 AF20080910、          级和二级碎片离子信息等）与 mzCloud（www.mzCloud.
        AF20082308、AF21071602，纯度均大于 98％）均购自成                org）、PubChem（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）网络
        都埃法生物科技有限公司；鸟苷对照品（批号F2012066，                       数据库、中药成分高分辨质谱本地数据库 OTCML 进行
        纯度≥98％）购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；                           比对，设置两者一级、二级质量的误差为5 ppm。
        腺苷对照品（批号A8653358E，纯度≥98％）购自上海吉                      2.6 化学成分分析
        至生化科技有限公司；loroglossin 对照品（批号 210610，                2.6.1  正离子模式      取“2.3”项下供试品溶液和“2.4”项
        纯度≥97％）购自上海源叶生物科技有限公司；乙腈、甲                          下各单一对照品溶液，按“2.1”“2.2”项下条件进样分析，
        醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为纯净水。                              得山慈菇在正离子模式下的总离子流图（图1，对照品图
            山慈菇饮片（批号 201103）购自亳州市永刚饮片厂                      略）。根据各成分峰的碎片离子信息，按“2.5”项下方法
        有限公司，经贵州医科大学药学院生药学教研室刘春花                            处理质谱数据，并参考相关文献             [8－30] ，最终从山慈菇中共
        副教授鉴定为兰科植物云南独蒜兰P. yunnanensis Rolfe                 鉴定出24个化学成分。结果见表1。


        ·1166 ·  China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 10                                 中国药房    2022年第33卷第10期
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