Page 70 - 《中国药房》2022年4期

2.2.2 灰背清风藤和小花清风藤的检测条件 （1）GC 40种成分和小花清风藤中的33种成分，结果见表1～表
条件：色谱柱为 HP-5MS 弹性石英毛细管柱（60 m×0.25 3。按出峰顺序编号并按化合物类型统计各类成分的相
mm，0.25 μ m）；初 始 温 度 为 40 ℃ 并 保 持 2 min，以 对百分含量，结果见表4。
3.5 ℃/min升温至180 ℃，再以8 ℃/min升温至308 ℃并 1.4×10 7
1.2×10 7
保持 20 min；运行时间为 78 min；汽化室温度为 250 ℃； 1.0×10 7
载气为高纯氦气（99.999％），流速为1.0 mL/min；柱前压 丰度 8.0×10 6 6
6.0×10
为16.03 psi；溶剂延迟时间为6 min；分流比为9.97 ∶ 1；进 4.0×10 6
2.0×10 6
样量为0.2 μL。（2）MS条件：离子源为电子轰击源，离子 0
源温度为 230 ℃；四极杆温度为 150 ℃；电离能量为 70 10 20 30 40 50 60
t/min
eV；发射电流为34.6 μA；倍增器电压为1 941 V；接口温 A.鄂西清风藤
度为280 ℃；质量扫描范围为29～500 amu。 3.0×10 6
2.5×10 6
2.2.3 数据分析 分别精密吸取“2.1”项下鄂西清风藤、 2.0×10 6
灰背清风藤、小花清风藤低极性部位供试品溶液，按 丰度 1.5×10 6
1.0×10 6
“2.2.1”“2.2.2”项下检测条件进样分析，得总离子流图。
5.0×10 5
根据所得总离子流图，用NIST 17和Wiley 275数据库对 0
10 20 30 40 50 60 70
色谱峰进行检索，人工比对鉴定各化合物的结构，并采 t/min
用峰面积归一化法计算各成分的相对百分含量。 B.灰背清风藤
2.3 抗炎活性测定 3.5×10 6
3.0×10 6
参考文献[7]的方法，利用脂多糖诱导RA-FLS细胞 2.5×10 6 6
2.0×10
和 RAW264.7 细胞建立炎症模型，以 NO 生成抑制率评 丰度 1.5×10 6
1.0×10 6
价鄂西清风藤、灰背清风藤、小花清风藤低极性部位的 5.0×10 5
抗炎活性。将细胞接种于含10％胎牛血清的DMEM培 0
10 20 30 40 50 60 70
养基中，置于 37 ℃、5％二氧化碳细胞培养箱中培养。 t/min
C.小花清风藤
4
分别取处于对数生长期的上述两种细胞，按2×10 个/孔
图1 鄂西清风藤、灰背清风藤、小花清风藤低极性部位
接种于 96 孔板中，于细胞培养箱中培养 12 h，弃去上清
的总离子流图
液，将细胞分为模型组、鄂西清风藤组、灰背清风藤组、
小花清风藤组和吲哚美辛组（阳性对照）。模型组加入 表1 鄂西清风藤中低极性部位的成分信息
二甲基亚砜，药物组加入含相应药物的二甲基亚砜溶 编号 类型 中文名称（英文名称） 出峰时间/ 分子式 分子量 相对百分
液，每孔100 μL，上述药物的质量浓度均分别为0.1、0.3、 min 含量/％
1 长链脂肪烃 正庚烷（heptane） 7.328 C7H16 100 2.64
1、3、10、30 μg/mL（按低极性部位质量计），每组设置3个
2 长链酯 丙酸甲酯（ethyl propanoate） 7.702 C5H10O2 102 0.01
复孔。继续培养2 h后，按10 μL/孔加入100 μg/mL的脂 3 其他 甲苯（toluene） 9.396 C7H8 92 0.01
多糖（溶剂为含 10％胎牛血清的 DMEM 培养基）；继续 4 其他 乙苯（ethylbenzene） 13.004 C8H10 106 0.02
5 其他 对二甲苯（p-xylene） 106 0.08
培养 8 h 后，弃去上清液，按 NO 检测试剂盒说明书进行 13.322 C8H10
6 其他 邻二甲苯（o-xylene） 14.349 C8H10 106 0.03
操作，使用多功能酶标仪于540 nm波长下检测各孔的光 7 长链脂肪烃 正壬烷（nonane） 14.535 C9H20 128 0.01
密度（optical density，OD）值，按下式计算 NO 生成抑制 8 单萜 莰烯（camphene） 16.808 C10H16 136 0.01
率：NO 生成抑制率（％）＝（模型组 OD 值－药物组 OD 9 长链脂肪烃 正癸烷（decane） 18.998 C10H22 142 0.02
10 单萜 α-水芹烯（α-phellandrene） 136 0.01
值）/模型组 OD 值×100％。数据以 x±s 表示，并通过 19.314 C10H16
11 单萜 对伞花烃（p-cymene） 20.227 C10H14 134 0.01
Grphpad Prism 5.0 软件计算各药物组的半数抑制浓度 12 单萜 β-水芹烯（β-phellandrene） 20.447 C10H16 136 0.07
（median inhibitory concentration，IC50 ）。 13 单萜 八氢-4，7-亚甲基-1H-茚（octahydro-4， 23.376 C10H16 136 0.01
7-methano-1H-indene）
3 结果
14 长链脂肪烃 正十一烷（undecane） 23.444 C11H24 156 0.01
3.1 3 种清风藤属植物低极性部位成分 GC-MS 分析 15 长链醛 壬醛（nonanal） 23.718 C9H18O 142 0.01
结果 16 长链脂肪烃 5-甲基-5-十一碳烯（5-methyl-5-undecene） 26.065 C12H24 168 0.03
鄂西清风藤、灰背清风藤、小花清风藤低极性部位 17 长链脂肪烃 （Z）-7-甲基-5-十一碳烯[（Z）-7-methyl-5- 26.660 C12H24 168 0.02
undecene]
的总离子流图见图1。经NIST 17和Wiley 275数据库检
18 长链脂肪烃 5-甲基-4-十一碳烯（5-methyl-4-undecene） 26.746 C12H24 168 0.03
索，并分析比对其中相似度≥80％的结构，分别确定了 19 长链脂肪烃 1-十二烯（1-dodecene） 27.358 C12H24 168 0.09
鄂西清风藤低极性部位中的70种成分、灰背清风藤中的 其他：包括苯系物、苯丙素和邻苯二甲酸酯3类成分

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