Page 69 - 《中国药房》2022年4期
P. 69

清风藤科（Sabiaceae）清风藤属（Sabia）植物，全世界               由贵州中医药大学孙庆文教授鉴定分别为清风藤科清
        约有63种，在我国主要分布于西南部，西北和东部地区                          风藤属植物灰背清风藤 S. discolor Dunn 的干燥茎叶和
        亦 有 少 量 分 布 ，包 括 鄂 西 清 风 藤 Sabia campanulata       小花清风藤 S. parviflora Wall. ex Roxb.的干燥茎叶。以
        Wall. ex Roxb. subsp. ritchieae（Rehd. et Wils.）Y. F. Wu、  上药材标本均存放于贵州省中国科学院天然产物化学
        灰背清风藤 S. discolor Dunn、小花清风藤 S. parviflora         重点实验室。
        Wall. ex Roxb.、清风藤S. japonica Maxim.等25种。清风            吲哚美辛对照品（批号 1000258-201905，纯度≥
        藤属植物易与防己科中药青风藤混淆 ，而前者绝大多                           99.9％）购自中国食品药品检定研究院；脂多糖购自上海
                                         [1]
                                   [2]
        数植物也均有一定的药用价值 ，但有关化学成分和生                           碧 云 天 生 物 技 术 有 限 公 司 ；NO 检 测 试 剂 盒（批 号
        物活性的研究有限。其中，小花清风藤是一种布依族                            20210114）购自南京建成生物工程研究所；胎牛血清（批
        药，具有清热利湿、利胆、止血等功效，主治黄疸湿热症、                         号 BC20201204）和 DMEM 培养基（批号 10113624）均购
                [3]
        外伤出血 ，已报道的化学成分主要为阿朴菲类生物碱、                          自美国Gibco公司；细胞培养皿、96孔细胞培养板、细胞
        五环三萜、黄酮醇和木脂素等 。研究表明，小花清风藤                          培养瓶均购自美国 Corning 公司；GF254硅胶板（规格 50
                                 [4]
        提取物可改善类风湿性关节炎模型大鼠足跖的溶骨、肿                           mm×100 mm，批号 20200713）和柱层析硅胶（200～300
        胀症状，减轻其滑膜组织炎症细胞浸润和血管翳增生 ，                          目，批号 2055）均购自青岛海洋化工有限公司；正己烷
                                                     [5]
        作用机制可能与下调基质金属蛋白酶9和肿瘤坏死因子                           （分析纯）和二甲基亚砜（分析纯）均购自国药集团化学
        α等炎症因子的表达有关 。而鄂西清风藤和灰背清风                           试剂有限公司；乙醇（分析纯）和石油醚（沸程 60～
                              [6]
        藤尚无系统的化学成分及药理作用研究，有进一步开发                           90 ℃，分析纯）均购自天津富宇精细化工有限公司；其余
        的潜力。                                               试剂均为分析纯或实验室常用规格，水为纯化水。
            植物提取物中的低极性成分多集中在石油醚萃取                          1.3  细胞
        部位，主要结构类型多为长链脂肪烃、单萜、倍半萜等，                              人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞 RA-FLS、小
        种类众多且结构差异小。低极性成分在清风藤属植物                            鼠单核巨噬细胞RAW264.7均购自上海博垒生物科技有
        中大量存在，但尚未被研究与利用。笔者在研究鄂西清                           限公司。
        风藤、灰背清风藤、小花清风藤化学成分的过程中发现，                          2 方法
        三者低极性部位的化学成分组成各不相同。基于此，本                           2.1  供试品溶液的制备
        研究采用气相色谱-质谱（gas chromatography-mass spec-              取鄂西清风藤、灰背清风藤、小花清风藤样品，粉碎
        trometry，GC-MS）技术，分析比较了鄂西清风藤、灰背清                   后，分别用 10 倍量（L/kg）的 80％乙醇回流提取 3 次，每
        风藤、小花清风藤石油醚低极性部位的成分特点，并评                           次 3 h，合并提取液，减压浓缩至无醇味后加水混悬，用
        价了三者对脂多糖诱导的人类风湿性关节炎成纤维样                            等体积石油醚萃取3次，合并石油醚萃取液并浓缩至浸
        滑膜细胞RA-FLS和小鼠单核巨噬细胞RAW264.7炎症                      膏状。采用常压硅胶柱色谱对石油醚萃取部位进行分离，
        模型中一氧化氮（nitric oxide，NO）生成的影响，以期为                  以石油醚-二氯甲烷（100 ∶ 0、99 ∶ 1、95 ∶ 5、90 ∶ 10、80 ∶ 20、
        清风藤属植物资源的综合利用提供科学依据。                               50 ∶ 50、0 ∶ 100，V/V）进行梯度洗脱，合并其中首段由石油
        1 材料                                               醚洗脱的部分并浓缩，于真空干燥器中干燥，得低极性
        1.1  主要仪器                                          部位样品。称取上述低极性部位样品 10 mg，以正己烷
            本研究所用主要仪器包括HP6890/5975C型GC-MS                  溶解并用 0.45 μm 微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品
        仪（美国 Agilent 公司）、EPOCH 型多功能酶标仪（美国                  溶液。
        Bio-Tek公司）、3111型二氧化碳细胞培养箱（美国Ther-                  2.2 GC-MS分析
        mo Fisher Scientific 公司）、CX23 型生物显微镜（日本            2.2.1  鄂西清风藤的检测条件 （1）GC条件：色谱柱为
        Olympus公司）、HFsafe-1200LC型生物安全柜[力新仪器                HP-5MS 弹性石英毛细管柱（60 m×0.25 mm，0.25 μm）；
       （上海）有限公司]、300 mm真空干燥器（重庆欣维尔玻璃                       初始温度为 40 ℃并保持 2 min，以 3.5 ℃/min 升温至
        有限公司）等。                                            180 ℃，再以 10 ℃/min 升温至 310 ℃并保持 15 min；运
        1.2 主要药品与试剂                                        行时间为 70 min；汽化室温度为 250 ℃；载气为高纯氦
            鄂西清风藤于 2019 年 5 月采自湖北省恩施市芭蕉                    气（99.999％），流速为 1.0 mL/min；柱前压为 15.96 psi；
        乡，由云南中医药大学张君副教授鉴定为清风藤科清风                           溶剂延迟时间为 6 min；分流比为 50 ∶ 1；进样量为 0.2
        藤属植物鄂西清风藤S. campanulata Wall. ex Roxb. sub-        μL。（2）MS 条件：离子源为电子轰击源，离子源温度为
        sp. ritchieae（Rehd. et Wils.）Y. F. Wu的干燥茎叶；灰背清     230 ℃；四极杆温度为150 ℃；电离能量为70 eV；发射电
        风藤于 2018 年 12 月采自广西省荔浦市新坪镇猪头山，                     流 为 34.6 μ A；倍 增 器 电 压 为 1 847 V；接 口 温 度 为
        小花清风藤于2019年7月采自贵州省黔西南州安龙县，                         280 ℃；质量扫描范围为29～500 amu。


        中国药房    2022年第33卷第4期                                               China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 4  ·447 ·
   64   65   66   67   68   69   70   71   72   73   74