Page 77 - 《中国药房》2022年2期

科罗索酸、齐墩果酸、熊果酸色谱峰与相邻色谱峰的分 方程计算含量。结果显示，野鸦椿酸、山楂酸、科罗索
离度均大于1.5，理论板数按熊果酸峰计均大于5 000；各 酸、齐墩果酸、熊果酸含量的RSD均小于3％（n＝6），表
供试品溶液的主要色谱峰信息接近，图谱中5个已知色 明该方法重复性良好。（3）稳定性试验：取同一供试品溶
谱峰达到基线分离且保留时间与混合对照品溶液图谱 液（编号S1-1）适量，分别于室温下放置0、2、4、6、8、24 h
一致；各辅料溶液对上述成分的测定无干扰。此外，姜 时按照“2.4.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结
汁炙枇杷叶供试品溶液（编号S3-1）图谱中新增加了1个 果显示，野鸦椿酸、山楂酸、科罗索酸、齐墩果酸、熊果酸
色谱峰，经与辅料姜汁图谱对比，确认该新增色谱峰对 峰面积的 RSD 均小于 2％（n＝6），表明供试品溶液在室
应成分为姜汁成分。 温下放置24 h内稳定性良好。（4）加样回收率试验：精密
称取已知含量的枇杷叶生品（编号S1-1）9份，每3份为1
组，分别按已知量的80％、100％、120％加入混合对照品
265.23 2 溶液，按照“2.4.2（2）”项下方法制备供试品溶液，按照
1
“2.4.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样
191.61 6
4 回收率。结果显示，野鸦椿酸、山楂酸、科罗索酸、齐墩
11
mAU 117.99 3 5 10 GC 果酸、熊果酸的平均加样回收率为 98.21％～101.82％，
MS
7 8 9 JZ RSD均小于3％（n＝3）。
S7-1
S6-1
S4-1
44.36 S5-1 2.4.6 样品中5个三萜酸类成分的含量测定 分别取枇
S3-1
S2-1
S1-1 杷叶生品及不同炮制品适量，按照“2.4.2（2）”项下方法
S
－29.26 制备供试品溶液，按照“2.4.1”项下色谱条件进样测定，
0 7.25 14.49 21.74 28.99 36.23 43.48 50.73
t/min 记录峰面积并代入回归方程计算含量。结果显示，枇杷
S：混合对照品；S1-1：枇杷叶生品；S2-1：蜜炙枇杷叶；S3-1：姜汁炙 叶生品经炮制后，野鸦椿酸、山楂酸、科罗索酸、齐墩果
枇杷叶；S4-1：姜汁煮枇杷叶；S5-1：甘草汁炙枇杷叶；S6-1：甘草汁煮枇
酸、熊果酸5个成分的含量均出现不同程度的增加，其中
杷叶；S7-1：清炒枇杷叶；JZ：姜汁；MS：蜜水；GC：甘草汁；2：野鸦椿酸；
姜汁煮枇杷叶的野鸦椿酸、山楂酸、科罗索酸的含量增
5：山楂酸；6：科罗索酸；10：齐墩果酸；11：熊果酸；1、3～4、7～9：未知
成分；★：新增成分 加最多，甘草汁煮枇杷叶中的齐墩果酸、熊果酸的含量
图1 混合对照品、辅料、枇杷叶生品及不同炮制品的高 增加最多。5个三萜酸类成分平均总含量的高低顺序依
效液相色谱图 次为姜汁煮枇杷叶＞甘草汁炙枇杷叶＞清炒枇杷叶＞
2.4.4 线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液 1、2、 甘草汁煮枇杷叶＞姜汁炙枇杷叶＞蜜炙枇杷叶＞枇杷
3、4、5、10 mL，分别置于10 mL量瓶中，加入95％乙醇稀 叶生品。结果见表4。
表4 枇杷叶生品及不同炮制品中野鸦椿酸等5个成分
释至刻度，摇匀，按照“2.4.1”项下色谱条件进样测定。
的含量测定结果（x±±s，n＝10，mg/g）
以进样量（x，μg）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线
样品 野鸦椿酸 山楂酸 科罗索酸 齐墩果酸 熊果酸 合计
性回归，结果见表3。
枇杷叶生品 1.966±0.010 1.459±0.047 4.525±0.023 1.294±0.035 6.294±0.059 15.538±0.081
表3 野鸦椿酸等5个成分的回归方程和线性范围 蜜炙枇杷叶 3.453±0.010 2.109±0.038 6.278±0.028 1.518±0.037 7.147±0.225 20.505±0.260
待测成分 回归方程 r 线性范围/μg 姜汁炙枇杷叶 3.623±0.008 2.241±0.042 6.093±0.061 1.565±0.046 7.693±0.033 21.215±0.201
野鸦椿酸 y＝497.09x－55.338 0.999 9 2.18～21.8 姜汁煮枇杷叶 4.808±0.008 2.824±0.053 8.172±0.045 1.716±0.047 8.151±0.087 25.671±0.149
山楂酸 y＝438.57x－5.934 8 0.999 8 1.51～15.10 甘草汁炙枇杷叶 4.538±0.010 2.495±0.043 7.928±0.139 1.650±0.029 8.029±0.161 24.640±0.617
科罗索酸 y＝336x+14.426 0.999 8 2.70～27.00 甘草汁煮枇杷叶 4.066±0.009 2.316±0.029 6.236±0.029 1.817±0.051 8.470±0.137 22.905±0.178
齐墩果酸 y＝477.82x－12.787 0.999 8 0.55～5.50 清炒枇杷叶 4.083±0.011 2.413±0.023 6.944±0.068 1.627±0.036 8.111±0.105 23.178±0.087
熊果酸 y＝421.47x+23.936 0.999 8 3.03～30.30 2.5 枇杷叶生品及不同炮制品指纹图谱的建立
2.4.5 精密度、重复性、稳定性、加样回收率考察 （1） 采用高效液相色谱法操作。
精密度试验：精密吸取“2.4.4”项下混合对照品溶液（含 2.5.1 色谱条件 同“2.4.1”项。
野鸦椿酸545 μg/mL、山楂酸377.5 μg/mL、科罗索酸675 2.5.2 溶液的配制 同“2.4.2”项。
μg/mL、齐墩果酸 137.5 μg/mL、熊果酸 757.5 μg/mL），按 2.5.3 精密度、重复性、稳定性考察 （1）精密度试验：
照“2.4.1”项下色谱条件连续进样测定 6 次，记录峰面 取枇杷叶生品供试品溶液（编号S1-1）适量，按照“2.5.1”
积。结果显示，野鸦椿酸、山楂酸、科罗索酸、齐墩果酸、 项下色谱条件连续进样测定6次，以熊果酸色谱峰为参
熊果酸峰面积的 RSD 均小于 2％（n＝6），表明仪器精密 照，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果
度良好。（2）重复性试验：取同一枇杷叶生品（编号S1-1） 显示，11 个共有峰相对保留时间和相对峰面积的 RSD
6 份，按照“2.4.2（2）”项下方法制备供试品溶液，按照 均小于 2％（n＝6），表明该方法精密度良好。（2）重复性
“2.4.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并代入回归 试验：取枇杷叶生品（编号S1-1）2 g，共6份，按照“2.5.2”

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