Page 53 - 《中国药房》2022年1期
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梗死等多种疾病均是HLP的关键危险因素                  [1－3] 。随着人    技术有限公司，批号分别为SP-9001、ZLI-9018），BCA蛋
        们生活水平的提高及生活习惯的改变，我国HLP的发病                          白定量检测试剂盒、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶
        率高达 40.40％   [4－6] 。本团队前期通过临床观察发现，珊                电泳（SDS-PAGE）制备试剂盒（武汉赛维尔生物科技有
        瑚七十味丸能降低HLP患者总胆固醇（total cholesterol，               限公司，批号分别为 G2026、G2003），兔抗大鼠 AMPK、
        TC）、三酰甘油（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白胆固醇                磷酸化 AMPK（p-AMPK）、LKB1、3-羟基-3-甲基戊二酸
       （low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、高密度脂    单 酰 辅 酶 A 还 原 酶（3-hydroxy-3 methylglutaryl coen-
        蛋 白 胆 固 醇 （high-density lipoprotein cholesterol，   zyme areductase，HMGCR）单克隆抗体（北京博奥森生物
        HDL-C）等指标；此外，本团队前期还对珊瑚七十味丸中                        技 术 有 限 公 司 ，批 号 分 别 为 bs-10344R、bs-12972R、
        铜、铅、镉、砷、汞5种重金属含量进行了测定 。通过以                         bs-3948R、bs-5068R），兔抗大鼠β-肌动蛋白（β-actin）、辣
                                              [7]
        上研究发现，珊瑚七十味丸是一种安全、有效的 HLP 治                        根过氧化物酶标记的山羊抗兔免疫球蛋白G（IgG）二抗
        疗药物。但是，珊瑚七十味丸治疗HLP的分子机制尚不                          （武汉赛维尔生物科技有限公司，批号分别为GB11001、
        清楚，影响了该药的临床应用。                                     GB23303）；其余试剂均为分析纯，水为蒸馏水。
            目前，越来越多的研究证实，HLP 的发生发展与肝                       1.3 动物
        激酶 B1（liver kinase B1，LKB1）/AMP 活化蛋白激酶 1               本研究所用动物为健康 SD 大鼠，共 60 只（雌雄各
       （AMP-activated protein kinase，AMPK）信号通路相关。          半），体质量为180～200 g，鼠龄为8周，由郑州市惠济区
        LKB1/AMPK是脂代谢相关通路，其中AMPK蛋白是所                       华兴实验动物养殖场提供，实验动物生产许可证号为
        有真核生物的中央代谢“开关”，控制葡萄糖和脂质代                           SCXK（豫）2019-0002。本实验得到了河南中医药大学
        谢，以响应营养物质和细胞内能量水平的变化 。LKB1                         动物伦理委员会的批准（批准号为DWLL20180018），实
                                               [8]
        是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，可直接磷酸化并激活                           验过程严格遵守“3R”原则。实验期间动物饲养室环境
        AMPK，调节肝脏、肌肉和脂肪等组织的功能，以代谢组                         温度为 20～22 ℃、相对湿度为 55％～60％、正常光照，
                                 [9]
        织中的脂质、胆固醇和葡萄糖 。因此，本研究通过饲喂                          大鼠自由饮水采食。
        高脂饲料的方法制备HLP大鼠模型，观察珊瑚七十味丸                          2 方法
        对 其 血 脂 指 标（TC、TG、HDL-C、LDL-C）及 LKB1/              2.1  动物分组、给药与造模
        AMPK信号通路相关蛋白的影响，探讨珊瑚七十味丸的                              将60只SD大鼠按体质量随机分为正常组、模型组、
        降血脂作用及分子机制，为该药的临床应用提供实验依                           辛伐他汀组（阳性对照，20 mg/kg，为成人临床给药剂量
        据，也为其深度开发奠定基础。                                     的7倍等效剂量）和珊瑚七十味丸低、中、高剂量组（50 、
        1 材料                                               100 、200 mg/kg，分别为成人临床给药剂量的 3、6、12 倍
        1.1  主要仪器                                          等效剂量），每组 10 只，雌雄各半。适应性喂养 1 周后，
            本研究所用的主要仪器有 BS110S 型电子天平（北                     模型组、辛伐他汀组和珊瑚七十味丸低、中、高剂量组大
        京赛多利斯天平公司），MR-96TB 型酶标仪[骋克仪器                       鼠饲喂高脂饲料（含 68％基础饲料、10％白糖、10％猪
       （上海）有限公司]，RM2235型石蜡切片机（德国Leica公                     油、10％蛋黄粉、2％胆固醇）以制备HLP模型，正常组大
        司），D3024R 型台式高速冷冻型微量离心机[大龙兴创                       鼠饲喂常规饲料，连续喂养 4 周 。辛伐他汀组和珊瑚
                                                                                       [10]
        实验仪器（北京）有限公司]，YD-6D 型组织包埋机、                        七十味丸低、中、高剂量组大鼠在造模同时即开始灌胃
        YD-A 型组织摊片机、YD-B 型组织烤片机（金华市科迪                      相应药物进行干预，正常组和模型组大鼠灌胃等体积生
        仪器设备有限公司），CX23型光学显微镜（日本Olympus                     理盐水，灌胃体积均为10 mL/kg，每天1次，连续4周。
        公司），NanoDrop2000 型超微量分光光度计（美国 Ther-                2.2 生化指标检测
        mo Fisher Scientific公司）。                               末次灌胃后，各组大鼠禁食不禁水 12 h，以氨基甲
        1.2 主要药品与试剂                                        酸乙酯1 g/kg腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，分离（4 ℃，
            本研究所用的主要药品与试剂有珊瑚七十味丸（西                         3 000 r/min，10 min）大鼠血清，按照相应试剂盒方法检
        藏雄巴拉曲神水藏药有限公司，批号 2020040302，规格                     测血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C水平。
        1 g/丸），辛伐他汀片[华润双鹤利民药业（济南）有限公                       2.3 病理检查
        司，批号 1810409，规格 10 mg/片]，氨基甲酸乙酯（天津                     采用苏木精-伊红（HE）染色法进行检查。取血后，
        百伦斯生物技术有限公司，批号 20200326），TC、TG、                    解剖并取大鼠肝组织。取各组大鼠相同位置的肝组织，
        HDL-C、LDL-C测定试剂盒（南京建成生物工程研究所，                      置于4％多聚甲醛溶液中固定24 h，常规石蜡包埋、切片
        批号分别为 A110-1-1、A111-1-1、A112-1-1、A113-1-1），        （厚度为4 μm），行HE染色，然后将切片置于显微镜下观
        兔SP检测试剂盒、DAB显色试剂盒（北京中杉金桥生物                         察肝组织的病理改变。


        中国药房    2022年第33卷第1期                                                China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 1  ·47 ·
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