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The mRNA and protein expression levels of Smad7 in liver tissue were decreased significantly（P＜0.05）. The degree of liver tissue
injury and collagen fiber hyperplasia were serious. Compared with model group，above indexes of mice were reversed significantly
in positive control group and M. convoluta total flavonoids high-dose group（P＜0.05 or P＜0.01）. Serum level of ALT，the levels
of COL- Ⅰ ，mRNA and protein expression of TGF-β 1，Smad2 and Smad4 in liver tissue were decreased significantly in M.
convoluta total flavonoids medium-dose group（P＜0.05 or P＜0.01）. Protein expression of Smad2 and Smad4 in liver tissue were
decreased significantly in M. convoluta total flavonoids low-dose group （P＜0.05）. The liver injury and fibrosis of mice were
relieved in administration groups. CONCLUSIONS：M. convoluta total flavonoids possess the effect of anti-hepatic fibrosis，the
mechanism of which is related to the regulation of mRNA and protein expression of TGF-β 1，Smad2，Smad4 and Smad7 in the
signaling pathway of TGF-β/Smad.
KEYWORDS Marchantia convoluta；Total flavonoids；Hepatic fibrosis；TGF-β/Smad signaling pathway；Mice

肝纤维是多种慢性肝脏疾病所伴随的一种病理改 上林县，经广西中医药大学壮医药学院韦松基教授鉴定
变。在慢性肝脏疾病的发生发展过程中，若肝细胞外基 为地钱科植物拳卷地钱 M. convoluta Gao et Chang.的幼
质蛋白（ECM）过度沉积便会造成肝纤维化，并同时伴 嫩叶；秋水仙碱原料药（批号505A0361，纯度98％）购自
[1]
有炎症反应 。若肝纤维化得不到有效控制，便会发展 北京索莱宝科技有限公司；柱层析硅胶（粒径 200～300
成肝硬化 [2－3] 。肝纤维化的发展过程涉及多条细胞信号 目）购自青岛海洋化工有限公司；丙氨酸转氨酶（ALT）、
通路，其中转化生长因子β（TGF-β）/Smad通路是最主要 天冬氨酸转氨酶（AST）试剂盒（批号均为 20190219）均
[4]
的信号通路之一 ，阻断或调控该信号通路的传导已成 购自南京建成生物科技有限公司；Ⅰ型胶原蛋白（COL-
为防治肝纤维化药物研究的热点。 Ⅰ）、COL-Ⅲ、TGF-β1酶联免疫吸附检测（ELISA）试剂盒
拳卷地钱 Marchantia convoluta Gao et Chang.为广 （批号均为 201901）均购自武汉华联科生物技术有限公
西常见中草药，民间多用于治疗烫伤、骨折、体癣、疮病 司；TGF-β 1、Smad2、Smad4、Smad7、α-平滑肌肌动蛋白
不敛及黄疸型肝炎 。拳卷地钱中的主要活性成分为黄 （α-SMA）的 兔 单 克 隆 抗 体（批 号 分 别 为 EPR21143、
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[6]
酮类化合物 。相关研究表明，拳卷地钱总黄酮具有体 EP567Y、EP618Y、ab216428、GR212262-3）均购自美国
外抗乙型肝炎病毒以及保护四氯化碳所致大鼠急性肝 Abcam公司；总RNA提取试剂盒（批号04015）、cDNA第
损伤等药理活性 [7－8] 。本课题组前期预实验发现，拳卷 一链合成试剂盒（批号 03529）均购自天根生化科技（北
地钱总黄酮可抑制大鼠肝星状细胞（HSC）的增殖，提示 京）有限公司；其余试剂均为分析纯或实验室常用规格，
其可能具有抗肝纤维化作用。鉴于此，本研究拟以肝纤 水为超纯水。PCR 引物由生工生物（上海）股份有限公
维化小鼠为动物模型，以秋水仙碱为阳性对照药物（秋 司设计并合成。
水仙碱主要是通过抑制HSC的活化、增殖而起到有效的 1.3 动物
抗肝纤维化作用 ，为肝纤维化模型实验中常用阳性对 本研究所用动物为 SPF 级 KM 小鼠 72 只，体质量
[9]
照药 [10－11] ），研究拳卷地钱总黄酮的抗肝纤维化作用，并 18～22 g，雌雄兼用，购自湖南斯莱克景达实验动物有限
从TGF-β/Smad信号通路角度探讨其抗肝纤维化的可能 公司，动物生产许可证号为SCXK（湘）2016-0002。小鼠
作用机制，为进一步开发拳卷地钱的药用价值提供药理 购入后先在广西中医药大学动物实验中心适应性饲养
学依据。 3 d，然后再进行正式实验。本实验动物方案已获得广西
1 材料 中医药大学实验动物伦理委员会批准。
1.1 主要仪器 2 方法
Infinite M200pro型连续波长酶标仪购自瑞士Tecan 2.1 拳卷地钱总黄酮的制备
公司；DMIRB型倒置显微镜购自日本Leica公司；SST16 取拳卷地钱药材干燥品200 g，加入80％乙醇1 000
型离心机、Shandon Histocentre 3型组织包埋机均购自美 mL，在 74 ℃下加热回流提取 2 h，重复提取 3 次；合并 3
国 Thermo Fisher Scientific 公司；TGL-20M 型低温高速 次提取液，减压蒸馏回收乙醇（蒸至约 400 mL），待用。
离心机购自湖南湘仪实验室仪器开发有限公司；Tgro- 取浓缩后提取液50 mL，依次用等体积石油醚、乙酸乙酯
dient 型梯度聚合酶链式反应（PCR）仪、GAS7300B 型凝 萃取3次；合并乙酸乙酯萃取液并拌入硅胶，干法装柱，
胶成像仪均购自美国Bio-Rad公司。 然后用70％甲醇500 mL进行洗脱；收集洗脱液，减压蒸
1.2 主要药品与试剂 馏回收甲醇，即得拳卷地钱总黄酮干燥品，其纯度为
拳卷地钱药材于2019年10月采自广西壮族自治区 96.15％。经高效液相色谱法测定，拳卷地钱总黄酮干燥

·2364 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 19 中国药房 2021年第32卷第19期