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Bino-LED 型光学显微镜（麦克奥迪实业集团有限公                        20 mL/（kg·d），造模和干预均每天给药 1 次，连续给药
        司），HBS-1101 型酶标仪（南京德铁实验设备有限公                       14 d。
        司）等。                                               2.2 小鼠一般情况观察
        1.2 主要药品与试剂                                            每天观察并记录小鼠的生长发育、饮食、精神状态、
            奥拉米特片（批号20040185，规格0.1 g）购自湖南中                 毛色改变、皮肤黏膜颜色、大小便及对外界刺激的反应
        南制药有限责任公司；甘草酸二铵肠溶胶囊（阳性对照，                          等，隔日称定并记录小鼠体质量。
        批号 191127110，规格 50 mg）购自正大天晴药业集团股                  2.3 小鼠标本采集与肝指数计算
        份有限公司；异烟肼片（批号1911009，规格0.1 g）购自天                       末次给药后，各组小鼠禁食、不禁水12 h，称定体质
        津力生制药股份有限公司；利福平胶囊（批号191202，规                       量后腹腔注射 10％水合氯醛溶液（4 mL/kg）进行麻醉，
        格 0.15 g）购 自 四 川 制 药 制 剂 有 限 公 司 ；总 胆 红 素          摘眼球取血适量，以 3 000 r/min 离心 15 min，取上层血
       （TBIL）、直接胆红素（DBIL）、丙氨酸转氨酶（ALT）酶联                    清，于4 ℃下保存，待测。随后处死各组小鼠，取其完整
        免疫吸附测定法（ELISA）检测试剂盒（批号分别为                          肝脏并称定肝湿质量，计算肝指数（肝指数＝肝湿质量/
        20201212、20200512、20201112）均购自上海科华生物工              小鼠体质量×100％）。切取各组小鼠相同部位的肝组
        程股份有限公司；天冬氨酸转氨酶（AST）、碱性磷酸酶                         织，固定于4％多聚甲醛溶液中，用于苏木精-伊红（HE）
       （ALP）、γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）ELISA检测试剂盒（批号                   染色及SABC免疫组化检测；其余组织保存于－80 ℃冰
        分别为 202012114、202101007、202101001）均购自温州            箱中，用于ELISA检测。
        市维日康生物科技有限公司；总胆汁酸（TBA）ELISA检                       2.4 小鼠血清中肝功能指标测定
        测试剂盒（批号20-1118）购自北京九强生物技术股份有                           取各组小鼠血清适量，采用ELISA法以全自动生化
        限公司；伊红染料（批号20070321）购自天津市巴斯夫化                      分析仪测定血清中 TBIL、DBIL、ALT、AST、ALP、γ-GT、
        工有限公司；苏木精染料（批号68110020）购自北京兰杰                      TBA水平，具体操作按相应试剂盒说明书进行。
        柯科技有限公司；RAGE、肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA                   2.5  小鼠肝组织病理学检查
        检测试剂盒（批号分别为K11033093、M190905-102a）均                    取各组小鼠经多聚甲醛固定后的肝组织，行常规脱
        购自欣博盛生物技术有限公司；链霉抗生物素蛋白-生                           水、石蜡包埋后切片（约3 μm），以HE染色并置于光学显
        物素-过氧化物酶复合物（SABC）试剂盒、3，3′-二氨基联                     微镜下观察肝组织病理学变化情况。
        苯胺（DAB）显色试剂盒、兔HMGB1多克隆抗体试剂盒、                       2.6  小鼠肝组织中HMGB1、NF-κB蛋白表达测定
        兔核因子κB（NF-κB）多克隆抗体试剂盒（批号分别为                            采用 SABC 免疫组化法进行测定。取各组小鼠经
        K193314A、K193328E、OG11122356、AI07066414）均购         多聚甲醛固定后的肝组织，按SABC试剂盒说明书进行
        自武汉博士德生物工程有限公司；其余试剂均为分析                            操作，以 DAB 显色后，置于光学显微镜下观察（阳性表
        纯，水为纯化水。                                           达的细胞为棕色或棕褐色）。每张切片随机选取5个不
        1.3  实验动物                                          连续视野，用Image-Pro Plus 6.0软件计算单位测量区域
            本研究所用实验动物为 4 周龄雄性 SPF 级昆明小                     面积内的光密度值，用于评价阳性表达率。
        鼠，共60只，体质量为（20±2）g，实验动物生产许可证号                      2.7  小鼠肝组织中RAGE、TNF-α蛋白表达测定
        为SCXK（湘）2016-0002，由湖南斯莱克景达实验动物有                        取各组小鼠解冻后的肝组织200 mg，制备肝组织匀
        限公司提供。                                             浆，按ELISA法以酶标仪测定肝组织中RAGE、TNF-α蛋
        2 方法                                               白的表达水平，具体操作按相应试剂盒说明书进行。
        2.1 分组、造模与给药                                       2.8 统计学方法
            将 60 只小鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、                          采用SPSS 20.0软件对数据进行统计分析。计量资
        阳性对照组[甘草酸二铵60 mg/（kg·d），以临床常用剂量                    料以x±s表示，若数据同时满足正态分布及方差齐性检
        按体表面积比值法换算而得]和奥拉米特低、中、高剂量                          验则多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用
        组[80、160、320 mg/（kg·d），以临床常用剂量的1、2、4倍              LSD-t 检验；若不满足上述条件则采用 Kruskal-Wallis H
        按体表面积比值法换算而得]，每组10只。除空白组外，                         秩和检验。检验水准α＝0.05。
        其余各组小鼠均灌胃异烟肼[75 mg/（kg·d）]+利福平[75                  3 结果
        mg/（kg·d）]14 d 以复制 ATB-DILI 模型 ；与此同时，各             3.1 小鼠一般情况及肝湿质量、肝指数
                                          [8]
        给药组小鼠灌胃相应药液（均以生理盐水为溶剂），空白                              空白组小鼠生长发育正常，食欲、精神佳，毛发浓
        组和模型组小鼠灌胃生理盐水，各组小鼠灌胃体积均为                           密、色泽可，皮肤及大小便未见异常，应激反应强烈。与


        中国药房    2021年第32卷第18期                                            China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 18  ·2231 ·
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