Page 68 - 《中国药房》2021年13期

柱温为40 ℃；进样量为10 µL。 3.14 m/z 250.1→156.0
500
2.4.2 质谱条件 以电喷雾离子源为离子源，离子喷射 400
300
200
电压为 4.5 kV，离子源温度为 600 ℃；雾化气流速为 45 100
cps
L/h，辅助加热气流速为 45 L/h；气帘气（N2 ）压力为 14 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5
psi，碰撞气压力为 7 psi。以多反应监测（MRM）模式进 intensity， 500 3.30 m/z 285.3→193.1
行正离子扫描，用于定量分析的离子对分别为 m/z 400
300
200
250.1→156.0（SP）、m/z 285.3→193.1（内标），碰撞能量分 100
别为 25、43 eV，扫描时间为 200 ms。SP 和内标的二级 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5
t，min
质谱图见图1。 A.空白血浆
1.21 m/z 250.1→156.0
700
156.0
5.8×10 5 1
350 3.14
5.0×10 5
cps 0
4.0×10 5 intensity， 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5
cps 4 3.29 m/z 285.3→193.1
intensity， 3.0×10 5 184.0 2.4×10 4 2
1.6×10
2.0×10 5 0.8×10 4
250.1
107.8
1.0×10 5
0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5
t，min
0 B.空白血浆+SP+内标
100 120 140 160 180 200 220 240 260
m/z 1.28 m/z 250.1→156.0
A. SP 2.4×10 4
1.8×10 4 1
1.2×10 4
192.9
4.0×10 6 0.6×10 4
3.6×10 6 cps 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5
3.2×10 6 intensity， 3.28
2.8×10 6 2.1×10 5 m/z 285.3→193.1
222.0
cps 2.4×10 6 1.4×10 5 2
intensity， 2.0×10 6 6 0.7×10 5
1.6×10
1.2×10 6 228.1 285.3
179.1 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5
8.0×10 5 240.9 257.0 t，min
167.1 182.1
4.0×10 5 C.大鼠灌胃柳氮磺吡啶肠溶片0.5 h后的血浆样本
0
150 170 190 210 230 250 270 290 注：1. SP；2.内标
m/z Note：1. SP；2. internal standard
B. 内标
图2 大鼠血浆中SP和内标的典型MRM色谱图
图1 SP和内标的结构式及二级质谱信息
Fig 2 Typical MRM chromatograms of SP and inter-
Fig 1 Structure and MS/MS spectrum of SP and in-
nal standard in rat plasma
ternal standard
2.6 标准曲线的绘制和定量下限的考察
2.5 专属性考察
以50％甲醇为溶剂，按“2.1”项下方法配制7个不同
分别取不同来源的空白血浆 50 μL，用等体积的
质量浓度的SP标准溶液；分别移取各标准溶液50 μL至
50％甲醇代替内标溶液，其余按“2.3”项下方法处理后，
1.5 mL 离心管中，加入空白血浆 50 μL，依次配制成 SP
再按“2.4”项下条件进样分析，得空白血浆色谱图（图
质量浓度分别为 2、5、20、100、500、800、1 000 ng/mL 的
2A）；将质量浓度为 2 ng/mL 的 SP 标准溶液加入空白血
系列标准血浆样品，按“2.3”项下方法处理后，再按“2.4”
浆中，按“2.3”项下方法处理后，再按“2.4”项下条件进样
分析，得到空白血浆+SP+内标色谱图（图2B）；取单只大 项下条件进样分析，记录峰面积。以SP质量浓度（x）为
鼠灌胃柳氮磺吡啶肠溶片 0.5 h 后采集的血浆样品，按 横坐标、SP峰面积与内标峰面积的比值（y）为纵坐标，应
2
“2.3”项下方法处理后，再按“2.4”项下条件进样分析，得 用加权最小二乘法（w＝1/x）进行线性回归，得回归方程
到大鼠血浆样品色谱图（图2C）。由图2可见，SP和内标 为 y＝0.002 97x+0.002 02（r＝0.998 7）。这表明 SP 检测
的保留时间约分别为1.2、3.3 min，内源性杂质不干扰待 质量浓度的线性范围为 2～1 000 ng/mL，定量下限为 2
测成分的检测。 ng/mL。

·1598 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 13 中国药房 2021年第32卷第13期