Page 69 - 《中国药房》2021年13期

以 50％甲醇为溶剂，按“2.1”项下方法配制相应质 浓度分别为4、80、800 ng/mL的低、中、高质量浓度QC血
量浓度的 SP 标准溶液；精密移取该标准溶液 50 μL 至 浆样品，每个质量浓度样品平行制备 6 份，按“2.3”项下
1.5 mL 离心管中，加入空白血浆 50 μL，配制成 SP 质量 方法处理后，再按“2.4”项下条件进样分析，记录相应峰
浓度为2 ng/mL的定量下限血浆样品，按“2.3”项下方法 面积（A）；将不同来源的空白血浆按“2.3”项下方法处理
处理后，再按“2.4”项下条件进样分析，记录峰面积。每 后，再加入相应浓度的SP标准溶液和内标溶液，使质量
个分析批平行操作6个样品、连续操作3个分析批，分别 浓度与前者对应，每个质量浓度样品平行制备 6 份，按
根据同批随行标准曲线计算 SP 的实测质量浓度，并考 “2.4”项下条件进样分析，记录相应峰面积（B）；分别配
察批内、批间精密度[以相对标准偏差（RSD）表示，下同] 制含内标且质量浓度与前者对应的 SP 标准溶液，按
和准确度[以相对误差（RE）表示，下同]，结果见表1。由 “2.4”项下条件进样分析，记录相应峰面积（C）。按如下
表 1 可见，定量下限血浆样品的批内、批间 RSD 均不超 公式计算提取回收率：提取回收率（％）＝A/B×100％，结
过 10％，与理论质量浓度的 RE 均在±5％之内，符合 果见表 2。由表 2 可见，低、中、高质量浓度 QC 样品中，
2020年版《中国药典》（四部）“生物样品定量分析方法验 SP 的提取回收率（以平均值计）为 86.16％～95.26％，
证指导原则”的要求 。
[15]
RSD 均不高于 2.47％（n＝6）；内标的提取回收率（以平
表1 精密度和准确度试验结果
均值计）为 89.09％，RSD 为 14.2％（n＝6）。按如下公式
Tab 1 Results of precision and accuracy tests
计算基质因子：基质因子＝B/C×100％；以 SP 与内标的
批内试验（n＝6） 批间试验（n＝3）
理论质量浓 基质因子的比值作为内标归一化基质因子，结果见表
待测成分 实测质量浓度 实测质量浓度
度，ng/mL RSD，％ RE，％ RSD，％ RE，％
（x±s），ng/mL （x±s），ng/mL 2。由表2可见，低、中、高质量浓度QC样品的内标归一
SP 2 1.92±0.18 9.49 －4.11 1.92±0.19 3.62 －4.11 化基质因子（以平均值计）为 58.80％～62.53％，RSD 不
4 4.05±0.26 5.30 1.24 4.05±0.10 6.05 1.24
80 83.78±3.88 4.22 4.73 83.78±1.34 3.92 4.73 超过 6.06％，符合 2020 年版《中国药典》（四部）“生物样
800 785.56±33.13 1.59 －1.81 785.56±34.94 10.89 －1.81 品定量分析方法验证指导原则”的要求 。
[15]
2.7 精密度与准确度试验 表2 提取回收率与基质效应试验结果
以 50％甲醇为溶剂，按“2.6”项下方法配制 SP 质量 Tab 2 Results of extraction recovery and matrix ef-
浓度分别为 4、80、800 ng/mL 的低、中、高质量浓度质控 fect tests
（QC）样品，按“2.3”项下方法处理后，再按“2.4”项下条 提取回收率（n＝6） 基质效应，％
理论质量浓
件进样分析，记录峰面积。每个分析批平行操作6个样 待测成分 度，ng/mL 结果（x±s），％ RSD，％ 基质因子（x±s），％ 内标归一化的基质因子
品、连续操作3个分析批，分别根据同批随行标准曲线计 结果（x±s），％ RSD，％
SP 4 86.16±2.13 2.47 65.78±4.44 60.42±4.08 6.06
算各QC样品的实测质量浓度，并计算其批内、批间精密 80 89.11±1.46 1.64 64.01±2.19 58.80±2.02 3.37
度和准确度，结果见表1。由表1可见，SP低、中、高质量 800 95.26±2.17 2.28 68.07±3.63 62.53±3.34 3.79
内标 200 89.09±5.05 14.2 108.86±5.38
浓度 QC 样品的批内、批间 RSD 均小于 11％，与理论质
2.10 稳定性试验
量浓度的RE均在±5％之内，符合2020年版《中国药典》
以 50％甲醇为溶剂，按“2.6”项下方法配制 SP 质量
（四部）“生物样品定量分析方法验证指导原则”的要
浓度分别为4、80、800 ng/mL的低、中、高质量浓度QC血
求 。
[15]
浆样品，每个质量浓度样品平行制备5份，考察其在室温
2.8 稀释可靠性考察
（25 ℃）存放4 h、冻融（－80 ℃～室温）循环3次、－80 ℃
以 50％甲醇为溶剂，按“2.6”项下方法配制 SP 质量
冰箱保存 1 个月再处理以及处理后于 4 ℃冰箱中存放
浓度为 4 000 ng/mL 的高质量浓度血浆样品，再用空白
血浆稀释5倍，按此稀释倍数平行操作6份，按“2.3”项下 24 h 的稳定性。所有样品均按同批随行标准曲线计算
其实测质量浓度及 RSD。结果，低、中、高质量浓度 QC
方法处理后，再按“2.4”项下条件进样分析，记录峰面
积。根据同批随行标准曲线计算样品的实测质量浓度， 血浆样品在上述条件下，实测质量浓度的 RSD 均小于
并乘以稀释倍数计算最终质量浓度，将该值与对应的理 6.6％（n＝5），提示样品稳定性良好。
论质量浓度进行比较，用以考察精密度和准确度。结 3 SSZ药动学研究
果，大鼠血浆中 SP 稀释 5 倍后，所得样品实测质量浓度 3.1 动物实验方案
的RSD为1.1％（n＝6），与理论质量浓度的RE为－0.5％， 将 SD 大鼠随机分为 SSZ 组和 SSZ+ESOM 组，每组
表明稀释可靠性良好。 6 只。SSZ+ESOM 组大鼠每天于固定时间点灌胃 15
[16]
2.9 提取回收率和基质效应试验 mg/mL 的 ESOM 药液（给药剂量为 3.6 mg/kg ），每天 1
以 50％甲醇为溶剂，按“2.6”项下方法配制 SP 质量 次，连续给药 14 天；SSZ 组大鼠不作处理。所有大鼠在

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