Page 70 - 《中国药房》2021年13期

相同环境下正常喂养，直到 14 天末次给予 ESOM 后，禁 4 讨论
食、不禁水12 h，同时单次灌胃30 mg/mL的SSZ药液（给 样品的前处理是血浆中药物定量分析至关重要的
药剂量为90 mg/kg [10，16] ）。分别在此次给药后0.5、1、1.5、 一步。本课题组前期曾尝试使用 25％醋酸溶液和叔丁
2、3、4、6、8、10、12、24、36、48、72 h 于大鼠眼内眦采血 基甲醚或乙酸乙酯进行液液萃取，结果发现，此操作过
（采血量约 300 µL），置于肝素抗凝管中，于 4 000 r/min 程复杂且所需血浆量（500 μL）较大。与之相比，甲醇沉淀
离心10 min，分离血浆于－80 ℃保存，备用。 蛋白法操作过程简便、快速；同时与已有的 LC-MS/MS
3.2 平均药-时曲线的绘制及药动学参数的计算 法比较 ，本方法的血浆用量（50 μL）更少，更有利于样
[17]
取“3.1”项下冻存的血浆样品，放置至室温，按“2.3” 品的批量采集。
项下方法处理后，再按“2.4”项下条件进样分析，记录峰 在前期工作中，本课题组分别在正离子和负离子模
面积并按随行标准曲线计算其血浆中 SP 的质量浓度 式下对质谱参数进行了优化，发现在正离子模式下可获
（各时间点的血浆样品需用空白血浆稀释5倍），再采用 得更宽的线性范围和更强的色谱峰响应。同时，本课题
Origin Pro 9.1软件绘制其平均药-时曲线，结果见图3。 组曾尝试使用 C8和 C18两种反相色谱柱进行分离，通过
对流动相中有机相和水相的比例进行反复调试并结合
SSZ+ESOM
1 000 SSZ
内标物的筛选，最终确定使用色谱柱 Agilent XDR-C18
100 （2.18 mm×100 mm，1.8 μm），内标选择地西泮，流动相甲
c，g/mL μ 10 醇（A）-0.1％甲酸溶液（B）初始比例为 40 ∶ 60（V/V）。方
法学考察结果显示，待测成分SP和内标的响应均较强，
1
色谱峰峰形、峰强度和分辨率均较优；本方法的精密度、
0.1 准确度均符合2020年版《中国药典》（四部）“生物样品定
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 [15]
t，h 量分析方法验证指导原则”的要求 ；提取方法、基质效
图 3 大鼠灌胃柳氮磺吡啶肠溶片后 SP 的平均药-时 应均不影响待测成分的定量分析。这提示本法可行、简
间线 便、专属性强。与现已报道的分光光度法 、LC-MS/MS
[18]
[17]
Fig 3 Mean pharmacokinetic-time curves of SP in 法 和高效液相色谱法 [9，19－20] 相比，本法操作简单、所需
rats after intragastric administration of Sul- 血浆量少，且具有更高的灵敏度和准确性。
fasalazine enteric-coated tablets SP 是 SSZ 经肠道菌群分解所得的主要代谢物，约

采用DAS 3.0.1软件以非房室模型方法计算药动学 90％在结肠中被吸收入血。本文通过测定 SSZ 的代谢
参数，采用SPSS 22.0软件对数据进行统计分析。其中， 物SP在大鼠体内的血药浓度，进一步研究ESOM对SSZ
对 cmax和 AUC 先进行对数转化后再进行 t 检验；对 tmax进 药动学行为的影响。结果显示，当联合使用 ESOM 时，
行秩和检验，对 t1/2z、MRT0 － t、CLz、Vz 进行 t 检验。P＜ 大鼠体内SP的药动学参数cmax、AUC、t1/2z、MRT、CLz、Vz
0.05表示差异具有统计学意义，结果见表3。 和tmax均无明显变化。这不能排除可能与ESMO在大鼠
表 3 大鼠灌胃柳氮磺吡啶肠溶片后 SP 的药动学参数 体内作用时间较短、不足以使其肠道菌群发生改变有
（x±±s，n＝6） 关。此外，有研究表明，长时间使用 PPIs 可导致肠道中
[21]
Tab 3 Pharmacokinetic parameters of SP in rats after 厚壁菌门细菌增多 ；同时，除厚壁菌门中的葡萄球菌
intragastric administration of Sulfasalazine 属、芽孢杆菌属、梭菌属外，真杆菌属、拟杆菌属等多种
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enteric-coated tablets（x±±s，n＝6） 细菌也已经被证实能够产生偶氮还原酶 。因此，SSZ
药动学参数 SSZ+ESOM组 SSZ组 发生偶氮还原反应所需的酶不一定是由 ESOM 增多的
AUC0－t，μg/（L·h） 14 618.68±4 586.16 23 034.25±12 147.94 菌株所产生。在研究过程中，笔者还发现，在给药后的
AUC0－∞，μg/（L·h） 14 619.12±4 585.95 23 042.49±12 143.95 48～72 h内，两组大鼠体内的SP的血药浓度略有上述趋
MRT0－t，h 9.44±1.75 9.69±1.57
t1/2z，h 3.47±1.58 3.87±2.53 势，这可能与部分未被吸收入血的SSZ随胆汁转移至肠
tmax，h 7.33±2.42 9.33±2.42 道中并发生偶氮还原反应，生成SP被吸收入血有关 。
[23]
Vz，L/kg 32.50±15.02 19.30±5.51
CLz，L/（h·kg） 6.55±1.55 4.92±2.46 综上所述，本研究成功建立了测定大鼠血浆中SSZ
cmax，μg/L 1 629.77±687.43 2 445.98±964.11 代谢产物SP浓度的LC-MS/MS法，该方法操作简单、准
由表 3 可见，SSZ+ESOM 组与 SSZ 组比较，各药动 确、灵敏、所需血浆量少，对 SP 的血药浓度监测具有重
学参数组间差异均无统计学意义（P＞0.05），提示ESOM 要的参考价值。但本研究并未发现 ESOM 对 SSZ 药动
对SSZ在大鼠体内的药动学行为并无明显影响。 学行为有明显影响。由于本研究 ESOM 的用药时间有

·1600 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 13 中国药房 2021年第32卷第13期