Page 66 - 中国药房2021年11期

个。细胞按“2.5”项下方法转染并培养 24 h 后，再按 的释放量显著降低（P＜0.01），详见表2。
“2.4”项下方法检测焦亡阳性细胞比例。实验重复4次。 表 2 Pue 对缺氧 PASMCs 中 LDH 释放量和焦亡阳性
2.9 统计学方法 细胞比例的影响（x±±s，n＝6，％％）
采用 GraphPad Prism 6.01 软件进行统计分析。结 Tab 2 Effects of Pue on LDH release and pyroptosis
果数据均以 x±s 表示，多组比较采用单因素方差分析， positive cell ratio in hypoxic PASMCs（x ±± s，
组间两两比较采用 LSD-t 检验。P＜0.05 表示差异具有 n＝6，％％）
统计学意义。 组别 LDH释放量 焦亡阳性细胞比例
3 结果 常氧组 0.12±0.08 0.13±0.06
缺氧组 0.52±0.18 ＊＊ 0.78±0.15 ＊＊
3.1 Pue 对缺氧 PASMCs 中焦亡相关蛋白表达水平的 缺氧+Pue组 0.15±0.04 ## 0.15±0.09 ##
影响 注：与常氧组比较， P＜0.01；与缺氧组比较，P＜0.01
##
＊＊
与常氧组比较，缺氧组细胞中 NLRP3、caspase-1、 Note：vs. normoxia group， P＜0.01；vs. hypoxia group，P＜0.01
##
＊＊
IL-1β、ASC蛋白的表达水平均显著升高（P＜0.05或P＜ 3.3 Pue对缺氧PASMCs中焦亡阳性细胞比例的影响
0.01）；与缺氧组比较，缺氧+Pue组细胞中上述蛋白的表 与常氧组比较，缺氧组细胞红色荧光增强，其焦亡
达水平均显著降低（P＜0.05或P＜0.01），详见图1、表1。 阳性细胞比例显著升高（P＜0.01）；与缺氧组比较，缺
氧+Pue组细胞红色荧光减弱，其焦亡阳性细胞比例显著
NLRP3 117 kDa
降低（P＜0.01），详见图 2、表 2（图 2 中，Hosechst 33342
β-actin 42 kDa
表示视野内所有能被染色的活细胞图，PI表示发生焦亡
caspase-1 40～55 kDa 的细胞图，Merge为两者合并图，下同）。
β-actin 42 kDa 3.4 NLRP3过表达质粒构建的合格性
常氧+过表达质粒组细胞中 NLRP3 蛋白的表达水
IL-1β 31 kDa
平显著高于常氧+对照质粒组[（1.79±0.45）vs.（1.21±
β-actin 42 kDa
0.14），P＜0.05]，提示此NLRP3过表达质粒构建成功，可
用作后续研究，详见图3。
ASC 21 kDa
3.5 NLRP3 过表达时 Pue 对缺氧 PASMCs 中 NLRP3、
β-actin 42 kDa
caspase-1、IL-1β、ASC表达水平的影响
常氧组 缺氧组 缺氧+Pue组
与常氧+对照质粒组比较，缺氧+对照质粒组细胞中
图1 Pue对缺氧PASMCs中NLPR3、caspase-1、IL-1β、
NLPR3、caspase-1、IL-1β、ASC蛋白的表达水平均显著升
ASC蛋白表达影响的电泳图
Fig 1 Electrophoresis diagrams of the effects of Pue 高（P＜0.05 或 P＜0.01）；与缺氧+对照质粒组比较，缺
on the expression of NLPR3，caspase-1，IL-1β 氧+过表达质粒组细胞中上述4种蛋白的表达水平均显
and ASC protein in hypoxic PASMCs 著升高（P＜0.05 或 P＜0.01）；与缺氧+过表达质粒组比
较，缺氧+过表达质粒+Pue 组细胞中上述 4 种蛋白的表
表1 Pue对缺氧PASMCs中NLPR3、caspase-1、IL-1β、
达水平均显著降低（P＜0.05或P＜0.01），详见图4、表3。
ASC蛋白表达水平的影响（x±±s，n＝6）
3.6 NLRP3 过表达时 Pue 对缺氧 PASMCs 中 LDH 释
Tab 1 Effects of Pue on the expression of NLPR3，
放量的影响
caspase-1，IL-1β and ASC protein in hypoxic
与常氧+对照质粒组比较，缺氧+对照质粒组细胞中
PASMCs（x±±s，n＝6）
LDH的释放量显著升高（P＜0.01）；与缺氧+对照质粒组
组别 NLPR3 caspase-1 IL-1β ASC
常氧组 1.25±0.27 0.94±0.15 1.13±0.33 0.88±0.28 比较，缺氧+过表达质粒组细胞中LDH的释放量显著升
缺氧组 2.15±0.45 ＊ 1.46±0.36 ＊ 1.91±0.30 ＊ 1.59±0.27 ＊＊ 高（P＜0.05）；与缺氧+过表达质粒组比较，缺氧+过表达
缺氧+Pue组 1.14±0.60 # 0.94±0.19 # 0.82±0.21 ## 0.69±0.41 ##
质粒+Pue 组细胞中 LDH 的释放量显著降低（P＜0.05），
＊ ＊
＊
#
注：与常氧组比较， P＜0.05， P＜0.01；与缺氧组比较，P＜
详见表4。
0.05，P＜0.01
##
3.7 NLRP3过表达时Pue对缺氧PASMCs中焦亡阳性
Note：vs. normoxia group， P＜0.05， ＊ ＊ P＜0.01；vs. hypoxia
＊
#
group，P＜0.05，P＜0.01 细胞比例的影响
##
3.2 Pue对缺氧PASMCs中LDH释放量的影响 与常氧+对照质粒组比较，缺氧+对照质粒组细胞中
与常氧组比较，缺氧组细胞中LDH的释放量显著升 多见红色荧光，其焦亡阳性细胞比例显著升高（P＜
高（P＜0.01）；与缺氧组比较，缺氧+Pue 组细胞中 LDH 0.01）；与缺氧+对照质粒组比较，缺氧+过表达质粒组细
·1340 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 11 中国药房 2021年第32卷第11期