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c-Met 是受体酪氨酸激酶（RTK）家族 Ron 亚族中一                  一电子天平（上海菁海仪器有限公司）、KH-600E型超声
        个原型成员，是唯一一个已知的肝细胞生长因子（HGF）                          波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）、DW-86L486型
        的高亲和力受体（HGFR） 。已有研究表明，HGF/c-Met                     超低温保存箱（青岛海尔股份有限公司）等。
                              [1]
        活性与肿瘤的发生、发展和肿瘤细胞的分裂、血管生成、                           1.2 主要药品与试剂
        侵袭、转移、耐药性等密切相关，并在多种肿瘤组织中呈                               LWK-126原料药（批号20150216，纯度＞98％）由沈
                                      [1]
        现异常的高表达、突变及活性改变 。同时，c-Met 编码                        阳 药 科 大 学 提 供 ；甲 苯 磺 丁 脲 对 照 品（内 标 ，批 号
        基因的异常扩增、c-Met 或 HGF 的过表达、c-Met 编码基                  M26M7L15275，纯度＞98％）购自上海源叶生物科技有
                                           [2]
        因的突变都与肿瘤患者的不良预后有关 。目前，已有4                           限公司；烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸二钠（NADP-Na2，
        种小分子Met抑制剂获批在我国上市，但大部分仅用于                           批号 718B0225）、葡萄糖-6-磷酸-二钠（G-6-P-Na2，批号
        治疗携带 Met 外显子 14 跳跃突变的非小细胞肺癌患                        116B039）、葡 萄 糖 -6- 磷 酸 脱 氢 酶（G-6-P-DH，批 号
        者 [3－5] 。因此，开发新型、高效的小分子 c-Met 抑制剂是                  20160725）均购自北京索莱宝科技有限公司；甲醇、乙腈
        目前的一个重要研究方向。                                        均为色谱纯，氯化镁、柠檬酸钠等均为分析纯，其余试剂
            化合物LWK-126（结构式见图1）是一个通过对血管                      均为分析纯或实验室常用规格，水为纯净水。
        内皮生长因子（VEGF）和 HGF 受体抑制剂 Foretinib 的                 1.3 肝微粒体
        Linker部分进行结构修饰而得到的含咪唑酮酰胺片段的                             雄性 SD 大鼠肝微粒体（批号 MIC254034）、雄性比
        喹啉类衍生物；体外研究表明，LWK-126 对 c-Met、血管
                                                            格犬肝微粒体（批号 MIC257015）均购自上海斯信生物
        内皮生长因子受体（VEGFR）、干细胞生长因子受体
                                                            科技有限公司，男女混合人肝微粒体（批号 38292）购自
        （c-Kit）等多种激酶均表现出较好的抑制活性，半数抑制
                                                            美国Corning Costar公司，质量浓度均为20 mg/mL（以蛋
        浓 度（IC50 ）分 别 为 1.42、92.6、38.2 nmol/L 。 此 外 ，
                                              [6]
                                                            白计）。
        LWK-126 对 c-Met 依赖性肿瘤细胞的抑制活性优于                      2 方法与结果
                                   [7]
        Foretinib，具有一定的开发价值 。已有研究表明，在新
                                                            2.1  溶液的制备
        药研发早期，对先导化合物在不同种属肝微粒体中的体
                                                            2.1.1 LWK-126 贮备液      精密称取 LWK-126 原料药适
                                                   [8]
        外代谢稳定性进行研究，可有助于评价其代谢差异 。为
                                                            量，用甲醇溶解并定容于 10 mL 量瓶中，制成质量浓度
        此，本文参考文献[9－10]，建立了肝微粒体中LWK-126质
                                                            为1 mg/mL的LWK-126贮备液。
        量浓度的超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS），
                                                            2.1.2  内标溶液和终止液          精密称取甲苯磺丁脲对照
        比较了 LWK-126 在比格犬、大鼠、人肝微粒体中的代谢
                                                            品适量，按“2.1.1”项下方法制备质量浓度为1 mg/mL的
        稳定性，一方面为 LWK-126 的成药性评价提供参考，另
                                                            甲苯磺丁脲内标溶液。使用前，取上述内标溶液，用乙
        一方面为其后续的体内药效及毒理学研究的动物选择
                                                            腈稀释成甲苯磺丁脲质量浓度为1 μg/mL的终止液。
        提供依据。
                                                            2.1.3  还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）辅
                                                            酶溶液     称取 NADP-Na2 200 mg、G-6-P-Na2 200 mg、氯
                                                            化镁 133 mg，用水溶解并定容至同一 10 mL 量瓶中，
                                                            于－20 ℃下保存，记为 A 液。称取柠檬酸钠 44 mg、
                                                            G-6-P-DH 1 000 U，用水溶解并定容至同一 25 mL 量瓶
                                                            中，于－20 ℃下保存，记为B液。使用前，将A液和B液
                                                            按体积比5 ∶ 1混合均匀，即得NADPH辅酶溶液，其最终
                     图1 LWK-126的结构式                         浓度为1 mmol/L（以反应产物NADPH计）。
               Fig 1 Chemical structure of LWK-126          2.2 孵育体系的建立与处理
        1 材料                                                    取大鼠、比格犬、人肝微粒体各 0.1 mg，分别用 100
        1.1 主要仪器                                            mmol/L的磷酸盐缓冲液（PBS，pH＝7.4）稀释至0.5 g/L，
            本研究所用主要仪器包括 XevoG2-XS 型 UPLC-四                  随即加入 LWK-126 贮备液适量，使最终孵育体系中
        极杆串联飞行时间质谱仪（配有 MassLynx V4.1 型质谱                    LWK-126 的质量浓度为 5 μg/mL。将上述溶液于 37 ℃
        工作站、UNIFI 7.0 数据库，美国Waters公司）、DK-98-Ⅱ               水浴中预孵育5 min后，立即加入NADPH辅酶溶液启动
        型电热恒湿水浴锅（天津市泰斯特仪器有限公司）、X1                           反应。该孵育体系的总体积为 200 μL，其中 NADPH 的
        型高速离心机（香港基因有限公司）、JN300-2 型氮气吹                       终浓度为 1 mmol/L，甲醇的体积分数不超过 1％，LWK-
        扫仪（苏州吉米诺仪器有限公司）、FA805N 型十万分之                        126的终质量浓度为5 μg/mL，肝微粒体的终质量浓度为


        ·1326 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 11                                 中国药房    2021年第32卷第11期
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