Page 64 - 《中国药房》2021年10期
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党参（Codonopsis Radix）是临床常用的补益药，有                 自上海江莱生物科技有限公司；PrimeScript               TM  RT re-
                                    [1]
        健脾益肺、养血生津的传统功效 。中医腑脏理论认为，                           agent Kit with gDNA Eraser 反 转 录 试 剂 盒（批 号
       “脾”是一个功能性结构单位，曰“脾为后天之本”“四季                           A170713A）、TB Green Premix Ex Taq （Tli RNaseH
                                                                                              TM
        脾旺不受邪”“脾为之卫”，充分反映了脾与机体防御功                           Plus）荧光定量试剂盒（批号AJ52620A）均购自宝生物工
        能的关系     [2－3] 。脾虚证是临床常见证型，表现为运化功                   程（大连）有限公司；全蛋白提取试剂盒（批号KGP250）、
        能失调及免疫功能受损，与多种疾病的发生密切相                              BCA 蛋白定量试剂盒（批号KGPBCA）均购自江苏凯基
          [4]
        关 。党参多糖是党参发挥生物活性的重要物质基础之                            生物技术股份有限公司；超敏ECL化学发光检测试剂盒
        一，具有抗氧化应激、抗肿瘤、调节免疫等作用                    [5－6] 。研  （批号 SW134-01）购自赛文创新（北京）生物科技有限公
        究发现，党参多糖在胃肠道消化系统疾病中发挥重要作                            司 ；兔 源 密 封 蛋 白（Claudin）多 克 隆 抗 体（批 号
        用，可提高正常小鼠小肠蠕动能力、胃蛋白酶活性及其                            13050-1-AP）、兔源闭合蛋白（Occludin）多克隆抗体（批
                                                  [8]
               [7]
        排出量 ，也可缓解葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎 ，但有                           号 27260-1-AP）均购自武汉三鹰生物技术有限公司；兔
        关党参多糖补脾的作用机制研究尚少。鉴于此，本研究                            源β-肌动蛋白（β-actin）多克隆抗体（批号GB11001）购自
        拟采用番泻叶所致的苦寒泻下脾虚小鼠动物模型来评                             武汉赛维尔生物科技有限公司；辣根过氧化物酶标记的
        价党参多糖的补脾作用，并从调节胃肠激素分泌、增强                            山羊抗兔IgG二抗（批号RS0002）购自美国ImmunoWay
        免疫及保护肠黏膜屏障的角度来探讨其补脾机制，为其                            公司；其余试剂均为分析纯或实验室常用规格，水为蒸
        进一步开发利用提供参考。
                                                            馏水。
        1 材料                                                1.3 动物
        1.1 主要仪器                                                ICR 小鼠 60 只，雄性，SPF 级，体质量（18±2）g，由
            MS 352 型酶标仪购自芬兰 Thermo Labsystems 公
                                                            斯贝福北京生物技术有限公司提供，动物生产许可证号
        司；TG16W型微量高速离心机购自湖南湘仪离心机厂；
                                                            为SCXK（京）2016-0002。小鼠购入后分笼饲养，自由摄
        LightCycler 96 型 实 时 荧 光 定 量 - 聚 合 酶 链 式 反 应
                  ®
                                                            食 、饮 水 ，饲 养 环 境 温 度 为 20～22 ℃ 、相 对 湿 度 为
        （qRF-PCR）仪购自瑞士 Roche 公司；PowerPac 型电泳
                                                TM
                                                            40％～60％。实验操作均按照山西医科大学实验动物
        仪、ChemiDoc MP 型凝胶成像仪购自美国 Bio-Rad 公
                    TM
                                                            管理和使用委员会的要求执行。
        司；D30 型核酸蛋白检测仪购自德国 Eppendorf 公司；                    2 方法
        Z326K 型台式高速离心机购自德国 Hermle 公司；T2600
                                                            2.1  药液的制备
        型紫外-可见分光光度计购自上海佑科仪器仪表有限公
                                                            2.1.1  番泻叶溶液       称取番泻叶药材 50 g，加 5 倍量
        司；KZ-Ⅱ型高速组织研磨仪购自武汉赛维尔生物科技
                                                           （mL/g，下同）沸水，小火煎煮3.5 min，过滤，收集滤液并
        有限公司；DMi8 型倒置荧光显微镜购自德国 Leica 公
                                                            浓缩至1 g/mL（以生药量计），即得。
        司；101 型细胞计数器购自山东翼动新材料科技股份有
                                                            2.1.2  四君子汤     四君子汤的中药组成为党参12 g、茯
        限公司。
                                                                                      [9]
                                                            苓12 g、炒白术12 g、炙甘草6 g 。按处方量称取各药材
        1.2  主要药品与试剂
                                                            或饮片，加入8倍量水浸泡1 h，再用小火煎煮1 h，过滤，
            党参药材（批号20170901）购自山西省长治市，番泻
                                                            收集滤液；滤渣继续加 6 倍量水煎煮 1 h，过滤，收集滤
        叶（批号 20171201）、茯苓（批号 181001）、炒白术（批号
                                                            液。合并 2 次滤液，浓缩至 2 g/mL（以生药总量计），
        190402）、炙甘草（批号 190301）药材或饮片均购自山西
        省中医院；以上药材由山西医科大学药学院高建平教授                            即得。
        鉴 定 分 别 为 桔 梗 科 植 物 党 参 Codonopsis pilosula         2.1.3  党参多糖     党参多糖的制备参照课题组前期方
                                                              [10]
        （Franch）Nannf.的干燥根、狭叶番泻 Cassia angustifolia         法 。称取党参药材 500 g，切段，加 6 倍量水加热回流
        Vahl 的干燥叶、多孔菌科真菌茯苓 Poria cocos（Schw.）               提取 3 次、每次 1 h，分别过滤并收集滤液。合并 3 次滤
        Wolf.的干燥菌核、菊科植物白术 Atractylodes macro-               液，以 4 000 r/min 离心 15 min，收集上清液并减压浓缩
        cephala Koidz.的干燥根茎、豆科植物甘草 Glycyrrhiza              至原体积的 1/4，然后加 95％乙醇至乙醇的终体积分数
        uralensis Fisch.的干燥根和根茎。D-木糖试剂盒（批号                  为 80％，在 4 ℃下醇沉 12 h，然后以 4 000 r/min 离心 15
        20191028）购自南京建成生物工程研究所；小鼠免疫球                        min。收集沉淀，分别用无水乙醇、丙酮、乙醚各洗3次，
        蛋白G（IgG）、IgM、胃泌素（Gas）、胃动素（MTL）、生长抑                  然后在40 ℃真空干燥至恒定质量，即得到党参多糖（得
        素（SS）、血管活性肠肽（VIP）、淀粉酶（AMS）酶联免疫                      率为18.39％）。
        吸附测定（ELISA）试剂盒（批号分别为 MM-0057M1、                     2.2 分组、造模与给药
        MM-0058M1、MM-44405M1、MM-0492M1、MM-0493M1、               将 60 只小鼠按随机数字表分为空白组，模型组，党
        MM-0446M1、MM-1018M1）均购自江苏酶免实业有限                     参多糖高、中、低剂量组和四君子汤对照组，每组10只。
        公司；小鼠脂多糖（LPS）ELISA 试剂盒（批号 202012）购                  除空白组外，其余各组小鼠均按 0.4 g/d 灌胃番泻叶溶


        ·1210 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 10                                 中国药房    2021年第32卷第10期
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