Page 58 - 《中国药房》2021年第6期
P. 58

FGF-23 的表达而发挥肾保护作用 ；此外，新加药味中                        饲料饲养6周的方法建立CKD-MBD模型。正常组大鼠
                                      [6]
        的淫羊藿可促进成骨细胞增殖，可通过加快骨骼矿物质                            以普通饲料饲养，单纯高磷组大鼠以高磷饲料饲养，模
        生成和骨代谢、减少钙丢失、增加骨形成来发挥抗骨质                            型组和各药物组大鼠以腺嘌呤饲料和高磷饲料饲养（第
        疏松的作用      [7－8] 。基于此，本研究拟考察加味六味地黄                  1～4周喂养腺嘌呤饲料，第5～6周喂养高磷饲料），共6
        汤对CKD-MBD模型大鼠肾/骨组织损伤的影响，旨在为                         周。造模后，正常组和模型组大鼠继续以普通饲料/高磷
        进一步促进加味六味地黄汤的临床应用奠定基础。                              饲料饲养并灌胃水；各药物组大鼠改以普通饲料饲养并
        1 材料                                                灌胃相应药液（溶剂均为水）；按 0.1 mL/kg 每天灌胃 1
        1.1 主要仪器                                            次，连续6周。正常组大鼠末次给药后取血、处死，其余
            本研究所用主要仪器包括 SpectraMax Plus 384 型               各组分别于给药 2、4、6 周时随机取 10 只大鼠取血、
        全波长酶标仪（美国Molecular Devices公司）、TDZ4-WS               处死。
        型低速自动平衡离心机（湖南湘仪国际贸易有限公司）、                           2.2 大鼠血清中BUN、Scr、钙、磷含量检测
        X-ray System 型骨密度成像仪（美国 Carestream Image                取各时间点各组大鼠无抗凝血液样本适量，静置 1
        Station System 公司）、C501 型全自动生化分析仪（罗氏                h后以3 000 r/min离心15 min，取上清液，按照测试盒说
        诊断产品有限公司）、BX43 型光学显微镜（日本 Olym-                      明书进行操作，使用全自动生化仪检测大鼠血清中
        pus公司）等。
                                                            BUN、Scr、钙和磷含量。
        1.2 主要药品与试剂
                                                            2.3  大鼠血清中 iPTH、FGF-23、RANKL、骨钙素含量
            加味六味地黄汤（规格1 g/mL，以生药总量计）购自
                                                            检测
        广西中医药大学附属瑞康医院中药房，骨化三醇软胶囊
                                                                采用 ELISA 法进行检测。取各时间点各组大鼠无
        （阳性对照，批号 1902111，规格 0.25μg/粒）购自正大制
                                                            抗凝血液样本适量，静置 1 h 后以 3 000 r/min 离心 15
        药（青岛）有限公司，Masson 染液（批号 20190421JH）、
                                                            min，取上清液，按照 ELISA 试剂盒说明书进行操作，使
        Goldner’s染液（批号20181220）均购自北京索莱宝生物
                                                            用酶标仪于450 nm波长处测定光密度值并计算大鼠血
        科技有限公司，尿素氮（BUN）测试盒（批号 20190424）、
                                                            清中iPTH、FGF-23、RANKL、骨钙素含量。
        钙测试盒（批号20190405）、磷测试盒（批号20190305）均
                                                            2.4  大鼠骨密度检测
        购自南京建成生物科技有限公司，血肌酐（Scr）检测试
                                                                取各时间点各组大鼠左侧股骨置于骨密度成像仪
        剂盒（批号Mar2019）、全段甲状旁腺激素（iPTH）酶联免
                                                            托盘上，进行扫描后成像并应用Carestream V2.1软件分
        疫吸附测定（ELISA）试剂盒（批号Feb2019）均购自上海
                                                            析其股骨头的骨密度。
        江莱生物科技有限公司，FGF-23 ELISA 试剂盒（批号
                                                            2.5  大鼠肾组织和骨组织形态学观察
        190201）、RANKL ELISA试剂盒（批号181213）和骨钙素
                                                                取各时间点各组大鼠左侧1/2肾脏和股骨，置于4％
        ELISA 试剂盒（批号 180405）均购自武汉优尔生科技股
                                                            多聚甲醛磷酸盐缓冲液中，待骨组织脱钙后，将肾组织
        份有限公司；其余试剂均为分析纯或实验室常用规格，
                                                            和股骨组织依次脱水、透明、石蜡包埋、切片（厚度 4
        水为纯化水。
        1.3  动物与饲料                                          µm）。肾脏行Masson染色，股骨行Goldner’s三色染色，
            健康SPF级SD大鼠130只，雄性，体质量（250±20）                   使用光学显微镜观察大鼠肾组织和股骨组织的病理变
        g，购自长沙市天勤生物技术有限公司，动物生产许可证                           化。按文献[9]方法进行评估：首先计算 30 个高倍视野
        号为 SCXK（湘）2019-0014。所有大鼠均由广西中医药                    （×400）肾皮质中发生损伤（肾小管扩张、萎缩、管型、坏
        大学第一临床医学院动物实验部饲养，饲养条件为室温                            死或小管炎）的肾小管数和总肾小管数，以损伤的肾小
        18～25 ℃、相对湿度50％～60％、人工12 h昼/夜循环照                    管数占总肾小管数的百分比表示肾小管损伤百分比；对
        明。每日定时更换垫料、清洗笼舍，所有大鼠自由摄食、                           肾皮质间质纤维化程度进行半定量评估，分值为 0～4
        饮水。高磷饲料（磷含量 1.03％）、腺嘌呤饲料（腺嘌呤                        分，其中0分为正常、1分为肾间质纤维化面积不超过视
        含量0.75％）均购自北京科澳协力饲料有限公司。                            野的25％、2分为肾间质纤维化面积25％～49％、3分为
        2 方法                                                肾间质纤维化面积 50％～75％、4 分为肾间质纤维化面
        2.1 分组、造模与给药                                        积超过75％，取30个肾皮质间质视野（×40）内评分的平
            所有SD大鼠适应性饲养1周后，按体质量随机分为                         均值表示肾间质纤维化分值。
        正常组（n＝10）、单纯高磷组（n＝30）、模型组（n＝30）、                    2.6 统计学方法
        骨化三醇组（0.09 μg/kg，n＝30）和加味六味地黄汤组                         采用SPSS 20.0软件对数据进行统计分析。数据以
        （以生药总量计 10 g/kg，n＝30）。采用高磷联合腺嘌呤                     均数±标准差或均数表示，多组间比较采用单因素方差


        ·692 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 6                                    中国药房    2021年第32卷第6期
   53   54   55   56   57   58   59   60   61   62   63