Page 49 - 《中国药房》2021年第6期
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as Enterococcus was significantly increased （P＜0.05）. At the end of the recovery period，compared with model group，the
        activity，fecal morphology and color of rats in probiotics group，L-carnitine group and L-carnitine+probiotics group returned to
        normal，and the diversity and richness of intestinal flora had no significant difference （P＞0.05）. However，the abundance of
        Lactobacillus in intestinal tract was increased to a certain extent，and the abundance of Ackermann in intestinal tract of rats in
        L-carnitine + probiotics group was significantly increased （P＜0.05）. CONCLUSIONS：Although Bifidobacterium combined with
        L-carnitine have no significant effect on improving the diversity and richness of intestinal flora in dysbacteriosis diarrhea model
        rats，it could increase the abundance of probiotics to a certain extent.
        KEYWORDS    Intestinal flora；Probiotics；L-carnitine；Bifidobacterium；High-throughput sequencing；Diversity


            肠道菌群是寄生在人体肠道内的微生物群落的总                          注射用克林霉素磷酸酯（珠海亿邦制药股份有限公司，
        称，与人体健康密切相关，其不仅能够发挥屏障功能和                           批号 19040501，规格 0.75 g）、双歧杆菌三联活菌肠溶胶
                                                     [1]
        营养作用，而且还可参与机体代谢反应和免疫应答 。                           囊（晋城海斯制药有限公司，批号 20180701，规格 210
        正常情况下，肠道菌群中的正常菌群和致病菌群维持着                           mg）、磁珠法土壤和粪便基因组 DNA 提取试剂盒（北京
        一定的平衡，当这种平衡被打破时，机体则容易发生相                           天根生化科技有限公司，货号 DP712）、Phusion 超保真
                                                                                                    ®
                                              [2]
        应的疾病，如肠道炎症性疾病、代谢综合征等 。腹泻是                          PCR Master Mix（含GC缓冲液）试剂盒（美国NEB公司，
        造成发展中国家婴幼儿死亡的第二大原因，反复腹泻会                           货号 M0532S）、GeneJET 胶回收试剂盒（美国 Thermo
                                     [3]
        导致婴幼儿营养不良和发育迟缓 。相关研究表明，肠                           Fisher Scientific 公司，货号 K0731）、TruSeq DNA PCR-
        道菌群定植模式异常与新生儿腹泻、母乳喂养不耐受有                           Free Library Preparation Kit建库试剂盒（美国Illumina公
        关。当喂养不耐受发生时，新生儿肠道菌群的多样性及                           司，货号 FC-121-3001）；其余试剂均为分析纯或实验室
        丰富度明显降低 。此外，腹泻患儿体内肠道菌群中双                           常用规格，水为蒸馏水。
                      [4]
                            [3]
        歧杆菌的含量显著降低 。                                       1.3  动物
            益生菌（如双歧杆菌等）是目前临床上常用的新生                             健康SPF级SD大鼠，共30只，5周龄，雌雄各半，体
        儿腹泻治疗药物，能够调节患儿肠道微生态的多样性。                           质量（223±31）g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公
        研究表明，益生菌能够与致病菌竞争肠上皮细胞的结合                           司，实验动物生产许可证号为SCXK（湘）2013-0004。大
        位点，分泌抗菌肽和细菌素等，可有效地抑制致病菌的                           鼠购入后，分笼饲养于昆明医科大学附属延安医院中心
        生长；同时，其还具有增强肠道屏障、调节肠道免疫功能                          实验室，饲养室温度为（24±2）℃、相对湿度为 50％～
              [5]
        等作用 。左卡尼汀是一种哺乳动物体内能量代谢必需                           70％。本研究动物实验设计和实施方案通过了昆明医
        的天然物质，是新生儿的一种条件性必要营养素。正常                           科大学附属延安医院伦理委员会审核和批准。
        情况下，新生儿能够从母乳中获取左卡尼汀，但因母乳                           2 方法
        喂养不耐受引起的腹泻可能导致婴幼儿左卡尼汀缺乏，                           2.1  分组、造模与给药
                        [6]
        此时需要额外补充 。我院医师在临床实践中发现，联                               将 30 只 SD 大鼠适应性饲养 1 周后，按体质量随机
        合使用双歧杆菌和左卡尼汀治疗新生儿母乳喂养不耐                            分为空白对照组、模型组、益生菌组、左卡尼汀组和左卡
        受效果较好，但目前尚未检索到相关证据支持两者联用                           尼汀+益生菌组，每组6只，雌雄各半。实验第1～4天为
        具有协同作用，且相关作用机制亦不明确。因此，本研                           造模期：从实验第1天起，模型组、益生菌组、左卡尼汀组
        究利用抗生素建立菌群失调腹泻大鼠模型，通过研究左                           和左卡尼汀+益生菌组大鼠均灌胃 50 mg/mL 的克林霉
        卡尼汀和双歧杆菌联用对模型大鼠肠道菌群的影响，以                           素磷酸酯（2 mL/只，以生理盐水为溶剂配制），每天1次，
        期从肠道菌群角度出发初步探究双歧杆菌和左卡尼汀                            连续灌胃4天，复制菌群失调腹泻模型 ；空白对照组大
                                                                                             [7]
        联用治疗新生儿母乳喂养不耐受的作用机制。                               鼠灌胃等体积生理盐水。从实验第5天起进入恢复期：
        1 材料                                               益生菌组大鼠灌胃 70 mg/mL 的双歧杆菌三联活菌肠
        1.1 主要仪器                                           溶胶囊（以生理盐水为溶剂配制）；左卡尼汀组大鼠灌
            本研究所用主要仪器有HR/T16M型台式高速冷冻                       胃 50 mg/mL 的左卡尼汀（以生理盐水为溶剂配制）；左
        离心机（湖南赫西仪器装备有限公司）、T100型梯度聚合                        卡尼汀+益生菌组大鼠同时灌胃 70 mg/mL 的双歧杆菌
        酶链式反应（PCR）仪（美国Bio-Rad公司）、EPS 300型电                 三联活菌肠溶胶囊和 50 mg/mL 的左卡尼汀；空白对照
        泳仪（上海天能科技有限公司）、Qubit型荧光定量仪（美                       组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水。每天1次，各组
        国Thermo Fisher Scientific公司）、HiSeq2500 PE250型测     灌胃体积均为1 mL/只，连续给药7天。其中，左卡尼汀
        序系统（美国Illumina公司）等。                                和益生菌给药剂量根据药品说明书中人体剂量与大鼠
        1.2  主要药品与试剂                                       换算系数计算后设置。
            本研究所用主要药品与试剂有左卡尼汀注射液（常                         2.2 大鼠一般情况观察及标本采集
        州兰陵制药有限公司，批号 21811220，规格 5 mL∶ 1 g）、                   造模期及恢复期均每天称量并记录大鼠体质量、摄


        中国药房    2021年第32卷第6期                                               China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 6  ·683 ·
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