Page 78 - 《中国药房》2021年第4期

表 2 10 批藏药二十五味驴血丸样品 HPLC 指纹图谱 合系列线性工作溶液，按“2.2.2”项下色谱条件进样测
共有峰的相对保留时间 定，记录色谱图。以各待测成分质量浓度（X，μg/mL）为
Tab 2 Relative retention time of common peaks in 横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，结果见表4。
HPLC fingerprint of 10 batches of Tibetan 表4 秦皮乙素等5种有效成分的回归方程与线性范围
medicine Ershiwuwei luxue pills Tab 4 Regression equation and linear range of five ef-
峰号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 RSD，％ fective components including aesculetin
1 0.189 0.188 0.189 0.189 0.189 0.187 0.191 0.188 0.191 0.189 0.38 成分 回归方程 r 线性范围，μg/mL
2 0.195 0.195 0.195 0.194 0.195 0.196 0.196 0.194 0.197 0.194 0.39 秦皮乙素 Y＝40.873X－24.702 0.999 6 1.232～11.092
3 0.496 0.496 0.495 0.495 0.495 0.493 0.495 0.496 0.496 0.497 0.25 荭草苷 Y＝31.696X－40.752 0.999 5 2.766～24.893
4 0.855 0.855 0.852 0.850 0.857 0.855 0.856 0.856 0.857 0.853 0.12 异牡荆素 Y＝35.658X－25.417 0.999 8 1.400～12.600
5 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 0. 异金雀花素 Y＝31.897X－0.105 0.999 5 0.600～5.400
6 1.073 1.073 1.074 1.073 1.076 1.072 1.072 1.071 1.076 1.073 0.51 鞣花酸 Y＝15.732X－639.204 0.999 4 49.447～445.025
7 1.124 1.124 1.126 1.123 1.125 1.125 1.124 1.124 1.127 1.125 0.84 2.2.5 精密度试验 取“2.2.4”项下混合系列线性工作
8 2.137 2.137 2.137 2.137 2.136 2.134 2.134 2.137 2.138 2.135 0.16
9 2.849 2.848 2.848 2.845 2.846 2.843 2.843 2.845 2.849 2.849 0.23 溶液（秦皮乙素、荭草苷、异牡荆素、异金雀花素和鞣花
10 3.122 3.122 3.123 3.122 3.121 3.121 3.125 3.124 3.121 3.122 0.43 酸的质量浓度分别为 2.464、5.532、2.800、1.200、98.894
11 3.677 3.678 3.678 3.678 3.676 3.676 3.673 3.672 3.672 3.677 0.54
μg/mL）适量，按“2.2.2”项下色谱条件连续进样测定 6
表3 10批二十五味驴血丸样品HPLC指纹图谱共有峰 次，记录峰面积。结果，秦皮乙素、荭草苷、异牡荆素、异
的相对峰面积 金雀花素、鞣花酸峰面积的RSD分别为0.58％、1.67％、
Tab 3 Relative peak areas of common peaks in HPLC 1.86％、1.06％、1.28％（n＝6），表明仪器精密度良好。
fingerprint of 10 batches of Tibetan medicine 2.2.6 重复性试验 取藏药二十五味驴血丸样品（编号
Ershiwuwei luxue pills S1）0.5 g，共 6 份，按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，
峰号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 RSD，％ 再按“2.2.2”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并按标
1 0.252 0.452 0.478 0.521 0.269 0.365 0.562 0.662 0.365 0.426 33.44 准曲线法计算样品含量。结果，秦皮乙素、荭草苷、异牡
2 0.124 0.325 0.365 0.254 0.254 0.189 0.165 0.452 0.365 0.372 21.89
3 0.319 0.563 0.396 0.452 0.425 0.612 0.574 0.385 0.345 0.482 22.18 荆素、异金雀花素、鞣花酸含量的 RSD 分别为 1.91％、
4 0.285 0.425 0.365 0.214 0.254 0.325 0369 0.482 0.412 0.258 15.36 1.93％、1.76％、1.16％、0.84％（n＝6），表明方法重复性
5 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 0. 良好。
6 0.124 0.186 0.165 0.251 0.412 0.452 0.226 0.365 0.174 0.326 13.68
7 2.189 2.956 3.125 2.156 2.865 3.568 3.217 4.569 3.275 2.842 20.98 2.2.7 稳定性试验 取“2.2.1”项下供试品溶液（编号
8 1.636 1.097 1.058 1.135 1.792 1.426 0.915 1.430 1.513 1.571 44.11 S1）适量，分别于室温下放置 0、2、4、6、8、10、12、24 h时，
9 1.058 1.304 1.147 1.217 1.497 1.073 1.162 1.038 1.189 1.121 35.56 按“2.2.2”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，
10 0.761 0.847 0.880 0.739 1.198 0.774 0.723 0.747 0.821 0.791 51.63
11 12.537 9.370 8.667 9.433 14.857 8.394 8.942 7.512 7.645 7.411 67.19 秦皮乙素、荭草苷、异牡荆素、异金雀花素、鞣花酸峰面
积的 RSD 分别为 1.83％、1.61％、1.73％、1.52％、1.38％
2.2 5种有效成分的含量测定
（n＝8），表明供试品溶液于室温下放置 24 h 内稳定性
2.2.1 溶液的制备 供试品溶液的制备同“2.1.1”项，混
良好。
合对照品溶液的制备同“2.1.2”项。
2.2.8 加样回收率试验 取已知含量的藏药二十五味
2.2.2 色谱条件 色谱条件同“2.1.3”项。
驴血丸样品（编号S1）约0.25 g，共9份，分别按已知含量
2.2.3 系统适用性试验 取上述混合对照品溶液、供试
的80％、100％、120％加入“2.2.1”项下混合对照品溶液，
品溶液（编号S1）和空白溶液（甲醇）适量，按“2.2.2”项下
按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2.2”项下色
色谱条件进样测定，记录色谱图。结果，各待测成分的
谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率，结果
色谱峰分离度均大于1.5，理论板数均大于5 000，拖尾因
见表5。
子为0.9～1.1，空白溶液对5种成分的测定无干扰，详见 2.2.9 样品含量测定 取 10 批藏药二十五味驴血丸样
图3。 品粉末，每份约 0.5 g，按“2.2.1”项下方法制备供试品溶
2.2.4 线性关系考察 分别精密吸取“2.2.1”项下混合 液，再按“2.2.2”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并
对照品溶液适量，加80％甲醇制成秦皮乙素质量浓度分 按标准曲线法计算样品含量。每样品平行操作3次，取
别为 1.232、2.464、3.697、6.162、8.627、11.092 μg/mL，荭 平均值，结果见表6。
草苷分别为 2.766、5.532、8.298、13.829、19.361、24.893 2.3 聚类分析
μ g/mL，异 牡 荆 素 分 别 为 1.400、2.800、4.200、7.000、 以 10 批藏药二十五味驴血丸指纹图谱中测定的 5
9.800、12.600 μg/mL，异金雀花素分别为 0.600、1.200、 个已指认的共有峰（下同）的峰面积为变量，采用 SPSS
1.800、3.000、4.200、5.400 μg/mL，鞣花酸分别为 49.447、 19.0 软件进行分析，以 Pearson 相关性为测度，采用组间
98.894、148.342、247.236、346.131、445.025 μg/mL 的混 联接法绘制聚类分析图，结果见图4。由图4可知，10批

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