Page 75 - 《中国药房》2021年3期

供给池内仍有约1/2凝胶尚未溶蚀。 胶，均分别为 1、5、10 mg/L（以川芎嗪计）]，继续培养 24

80 h。弃去培养液，加入含 MTT 的 PBS 溶液后放置 4 h，弃
70
去含MTT的培养液，每孔加入150 μL二甲基亚砜，振荡
60
％ 50 川芎嗪水溶液 20 min后采用酶标仪在490 nm波长处测定吸光度（A），
累计透过量， 40 川芎嗪眼用脂质体温敏凝胶 按下述公式计算细胞存活率：细胞存活率＝（A 给 药－
川芎嗪脂质体
30
20 A 调零）/（A 空白－A 调零）。式中，A 给药、A 调零、A 空白分别表示给
10 药组、调零组、空白组的吸光度。试验重复5次。24 h内
0 不同质量浓度的川芎嗪制剂对 HCE-T 细胞存活率的影
0 1 2 3 4 5 6 7 8
时间，h 响见图6。
图 5 川芎嗪水溶液、脂质体及眼用脂质体温敏凝胶的 120
离体角膜透过曲线（n＝3） 90
％ 1 mg/L
Fig 5 Excised corneal permeation curves of solution， 5 mg/L
liposome and opthalmic liposome thermosensi- 细胞存活率， 60 10 mg/L
tive gel of ligustrazine（n＝3） 30
2.8.4 角膜水化值考察 取“2.8.3”项下川芎嗪水溶液 0
川芎嗪脂质体 川芎嗪眼用脂质体温敏凝胶
组、川芎嗪脂质体组和川芎嗪眼用脂质体温敏凝胶组离
图 6 24 h 内不同质量浓度的川芎嗪制剂对 HCE-T 细
体角膜，剪去未暴露于GBR溶液的角膜区域。称取暴露
胞存活率的影响（n＝5）
于 GBR 溶液的角膜区域质量，记为 Wb；将其于 65 ℃干
Fig 6 Effect of different concentration of ligustrazine
燥12 h后再次称质量，记为W a，计算角膜水化值[角膜水
preparation on the survival rate of HCE-T cells
化值＝（Wb－W a ）/Wb]，结果见表5。
within 24 hours（n＝5）
表5 角膜水化值测定结果（x±±s，n＝3）
由图6可知，低、中、高质量浓度（1、5、10 mg/L）的川
Tab 5 Corneal hydration values（x±±s，n＝3）
芎嗪脂质体和低、中质量浓度（1、5 mg/L）的川芎嗪眼用
考察对象 角膜水化值
川芎嗪水溶液 90.10±2.63 脂质体温敏凝胶对HCE-T细胞无明显的增殖毒性（细胞
川芎嗪脂质体 74.04±1.19 存活率＞85％）；高质量浓度（10 mg/L）的川芎嗪眼用脂
川芎嗪眼用脂质体温敏凝胶 72.98±1.13
质体温敏凝胶对HCE-T细胞显示出了一定的毒性，可能
角膜水化值是体外评价物质对角膜组织刺激性的 是由于高质量浓度脂质体温敏凝胶基质材料较多，改变
重要指标，若大于83％即可判定角膜受到一定程度的损 了培养基的状态，影响了细胞的正常生长。
伤 。由表 5 可知，川芎嗪脂质体和川芎嗪眼用脂质体 2.10 川芎嗪眼用脂质体温敏凝胶的眼部刺激性考察
[23]
温敏凝胶的角膜水化值都小于 83％，对角膜刺激性小； 取家兔6只，将其右眼作为实验眼，给予适量川芎嗪
但川芎嗪水溶液的角膜水化值大于83％，表明其对角膜 眼用脂质体温敏凝胶；左眼作为对照眼，给予等量生理
的刺激性大，究其原因，可能是因为未包封的川芎嗪原 盐水。分别记录单次给药后 2、6、12、24、72、96、120、
型药物直接与角膜上皮细胞接触，破坏了角膜上皮和内 144、168 h时兔眼的角膜、结膜、虹膜及其他前节组织情
皮细胞的紧密连接，进而使得角膜的水通透性增加。 况，按照 Draize 眼刺激实验评分标准 [24－25] 进行眼部刺激
2.9 不同川芎嗪制剂对HCE-T细胞增殖的影响 性考察，详见表6、表7。结果显示，实验眼的结膜多数在
将 HCE-T 细胞采用 DMEM 高糖培养基于 37 ℃、 第1次给药后产生少量分泌物，平均评分为（0.83±0.75）
5％ CO2条件下培养。当HCE-T细胞培养到70％～80％ 分，其余时间点两组兔眼前节组织评分均为 0 分，均在
融合程度后用PBS清洗2次，加入1 mL胰蛋白酶消化2 0～3分的无刺激性范围内。
min。当细胞变圆并开始脱落时加入 DMEM 高糖培养 2.11 川芎嗪眼用脂质体温敏凝胶对兔眼角膜组织学的
基5 mL终止消化且吹打均匀，采用15 mL的离心管收集 影响
混悬的细胞液，以 1 000 r/min 离心 5 min，弃去上清液， 取“2.10”项下实验家兔，于最后一次实验眼的眼表
加入DMEM高糖培养基2 mL，轻轻吹打混匀，制得细胞 滴入川芎嗪眼用脂质体温敏凝胶后 12 h 分离出角膜组
悬液。将细胞悬液以5×10 个/孔接种于96孔板中，分为 织，以10％中性福尔马林固定、梯度乙醇脱水、二甲苯清
3
给药组（不同浓度药物+细胞）、空白组（含细胞不含药 洗、石蜡固定、切片（厚度为3 μm），再以HE染色，用显微
物）和调零组（只含培养基），放入培养箱中培养 16 h 使 镜观察兔眼角膜及视网膜组织学改变；取另一只滴入生
细胞贴壁后弃去培养液，再分别加入低、中、高质量浓度 理盐水的对照眼同法操作，作为对照，结果见图7。由图
的药物溶液[川芎嗪脂质体和川芎嗪眼用脂质体温敏凝 7 可知，滴入川芎嗪眼用脂质体温敏凝胶的兔眼角膜上

中国药房 2021年第32卷第3期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 3 ·325 ·