Page 59 - 《中国药房》2021年第1期

2.5 紫草素对 HCT116 细胞中自噬相关蛋白表达的影
响考察 10 5 10 5
采用 Western blotting 法检测。取对数生长期的 10 4 10 4
HCT116 细胞，接种、分组、给药方法均同“2.4”项下，每 Comp-PE-A 10 3 Comp-PE-A 10 3
组均设置3个复孔。培养48 h后，用RIPA裂解液充分裂
10 2 10 2
解细胞并提取细胞中总蛋白，采用 BCA 法进行蛋白定
量，然后行变性处理后取蛋白50 μg在80 V电压下行十 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5
二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）150 Comp-FITC-A Comp-FITC-A
A.空白对照组 B.紫草素低质量浓度组
min，再以电流 200 mA 湿法转膜 80 min 至 PVDF 膜上，
以 5％脱脂奶粉进行常温封闭 1 h；加入β-actin、LC3Ⅱ/ 10 5 10 5
LC3Ⅰ、Beclin-1、p62 一抗（稀释度均为 1 ∶ 1 000），4 ℃
10 4 10 4
下孵育过夜；以PBST缓冲液洗膜3次，然后加入相应二
抗（稀释度均为1∶10 000），室温孵育1 h；以PBST缓冲液 Comp-PE-A 10 3 Comp-PE-A 10 3
洗膜3次，然后在凝胶成像系统中采用ECL化学发光液显 10 2 10 2
色。采用 Image J 1.52a 软件对蛋白条带进行分析，以 10 1 10 1
10 2 10 3 10 4 10 5 10 2 10 3 10 4 10 5
Beclin-1、p62蛋白条带与内参β-actin蛋白条带的灰度值 Comp-FITC-A Comp-FITC-A
C.紫草素中质量浓度组 D.紫草素高质量浓度组
之比表示Beclin-1、p62蛋白的表达水平，以LC3Ⅱ/LC3Ⅰ
图1 各组细胞凋亡情况的流式细胞图
的灰度值之比表示LC3蛋白的表达水平。试验重复3次。
Fig 1 Flow cytometry of cell apoptosis in each group
2.6 统计学方法
采用 SPSS 13.0 统计软件对试验数据进行统计分 表2 各组细胞凋亡率测定结果（x±±s，n＝3）
析。计量资料以x±s表示，多组间比较采用单因素方差 Tab 2 Apoptosis rate of cells in each group（x ±± s，
分析，两组间比较采用 LSD 检验。P＜0.05 表示差异具 n＝3）
有统计学意义。 组别 凋亡率，％
3 结果 空白对照组 8.34±3.57
紫草素低质量浓度组 22.46±5.23 ＊
3.1 紫草素对HCT116细胞增殖的影响 紫草素中质量浓度组 28.78±4.85 ＊
与空白对照组（细胞增殖抑制率计为 0）比较，紫草 紫草素高质量浓度组 41.39±7.90 ＊＊
＊
＊＊
素低、中、高质量浓度组细胞的增殖抑制率[依次为 注：与空白对照组比较，P＜0.05， P＜0.01
＊＊
＊
（30.76±5.57）％、（43.02±7.11）％、（68.18±9.29）％]均 Note：vs. blank control group，P＜0.05， P＜0.01
显著升高（P＜0.05），并具有一定的浓度依赖性趋势。 表 3 各组细胞中 LC3、Beclin-1、p62 mRNA 表达水平
3.2 紫草素对HCT116细胞凋亡的影响 测定结果（x±±s，n＝3）
与空白对照组比较，紫草素低、中、高质量浓度组细 Tab 3 mRNA expression of LC3，Beclin-1 and p62 in
胞的凋亡率均显著升高（P＜0.05或P＜0.01），并具有一 cells of each group（x±±s，n＝3）
定的浓度依赖性趋势。各组细胞凋亡情况的流式细胞 组别 LC3 mRNA Beclin-1 mRNA p62 mRNA
空白对照组 1.098 5±0.098 0 1.645 8±0.107 5 2.379 6±0.157 9
图见图1，凋亡率测定结果见表2。
紫草素低质量浓度组 1.249 6±0.239 4 1.938 9±0.094 8 ＊ 1.975 9±0.189 5 ＊
3.3 紫草素对HCT116细胞中自噬相关基因mRNA 表 紫草素中质量浓度组 1.579 4±0.264 8 ＊ 2.158 9±0.265 1 ＊ 1.176 0±0.085 8 ＊
达的影响 紫草素高质量浓度组 2.083 5±0.335 2 ＊ 2.565 9±0.315 9 ＊＊ 1.075 1±0.076 4 ＊＊
＊＊
＊
与空白对照组比较，紫草素中、高质量浓度组细胞 注：与空白对照组比较，P＜0.05， P＜0.01
＊
＊＊
中 LC3 mRNA 表达水平和紫草素低、中、高质量浓度组 Note：vs. blank control group，P＜0.05， P＜0.01
细胞中 Beclin-1 mRNA 表达水平均显著升高（P＜0.05 胞中LC3和Beclin-1蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05
或 P＜0.01），紫草素低、中、高质量浓度组细胞中 p62 或 P＜0.01），p62 蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05 或
mRNA 表达水平均显著降低（P＜0.05 或 P＜0.01）。各 P＜0.01）。各组细胞中LC3、Beclin-1和p62蛋白表达的
组细胞中 LC3、Beclin-1 和 p62 mRNA 表达水平测定结 电泳图见图2，表达水平测定结果见表4。
果见表3。 4 讨论
3.4 紫草素对 HCT116 细胞中自噬相关蛋白表达的 结肠癌是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一，据
影响 2018年全球癌症数据统计，结肠癌是导致癌症死亡的第
[12]
与空白对照组比较，紫草素低、中、高质量浓度组细 四大原因 。目前认为癌症的发生与肿瘤细胞凋亡及

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