Page 77 - 《中国药房》2020年第24期

2.2 仙鹤草浸出物提取工艺的建立
2.2.1 仙鹤草浸出物的提取条件 取仙鹤草药材（编
号：S14）粉末（过三号筛，下同）约 4 g，共 24 份，精密称
冷浸-50％乙醇
定，置于250 mL锥形瓶中，分别按2015年版《中国药典》 热浸-50％乙醇
冷浸-75％乙醇
（四部）通则“2201 冷浸法和热浸法” ，均分别以水、 热浸-75％乙醇
[16]
冷浸-95％乙醇
50％乙醇、75％乙醇、95％乙醇各100 mL为溶剂进行提 热浸-95％乙醇
冷浸-水
取（不同提取方法、溶剂条件均平行3份样品操作），用干 热浸-水
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
燥滤器迅速滤过，备用。 t，min
2.2.2 不同提取方法和溶剂对仙鹤草浸出物含量的影 图 1 不同提取方法和溶剂条件下仙鹤草浸出物的
响 精密量取“2.2.1”项下所得样品滤液 25 mL，分别置 HPLC特征图谱叠加图
于已干燥至恒质量的蒸发皿中，水浴蒸干，再于 105 ℃ Fig 1 HPLC superimposition chromatogram of A. pi-
干燥 3 h 后置于干燥器中冷却 30 min，迅速精密称定质 losa extract under different extraction methods
量，以干燥品计算仙鹤草浸出物含量[浸出物含量 and solvent conditions
（％）＝（干燥品质量×稀释体积）/（取样质量×取样体 表 3 不同提取方法和溶剂条件下仙鹤草浸出物（按每
积）×100％]，结果见表2。如表2所示，以不同溶剂采用 1 g生药计）的特征峰总峰面积（x±±s，n＝3）
热浸法提取后所测得的仙鹤草浸出物含量均高于以相 Tab 3 Total area of characteristic peak of A. pilosa ex-
应溶剂采用冷浸法提取所得的浸出物含量，且相同提取 tract（by 1 g of crude medicine）under different
方法、不同溶剂所得浸出物的含量排序均为 50％乙 extraction methods and solvent conditions（x±±
醇＞75％乙醇＞水＞95％乙醇。 s，n＝3）
表 2 不同提取方法和溶剂条件下仙鹤草浸出物含量 提取溶剂
提取方法
（x±±s，n＝3，，％％） 水 50％乙醇 75％乙醇 95％乙醇
冷浸法 28 319.29±3.89 148 332.09±18.24 153 703.94±131.06 71 113.16±21.01
Tab 2 Contents of A. pilosa extract under different ex-
热浸法 59 083.50±95.99 172 227.60±12.96 166 058.82±46.34 119 041.36±13.80
traction methods and solvent conditions（x±±s，
0.2，计算综合评分（综合评分＝浸出物含量/浸出物含量
n＝3，，％％）
最大值×40+特征峰总峰面积/特征峰总峰面积最大值×
提取溶剂
提取方法 40+过滤速度/过滤速度最大值×20），结果见表4。如表4
水 50％乙醇 75％乙醇 95％乙醇
冷浸法 14.41±1.02 19.97±0.51 17.30±0.17 11.51±0.57 所示，热浸法所得综合评分总体高于冷浸法，表明热浸
热浸法 18.56±0.23 21.07±0.28 18.64±0.41 13.58±0.40
法用于提取仙鹤草浸出物的效果更优。选择综合评分
2.2.3 不同提取方法和溶剂对仙鹤草浸出物特征图谱
最高（94.0分）的工艺为仙鹤草浸出物的最优提取工艺，
总峰面积的影响 取“2.2.1”项下仙鹤草浸出物滤液适
即以50％乙醇为溶剂、采用热浸法提取。
量，以 0.22 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，按“2.1.1”项下
表4 仙鹤草浸出物不同提取工艺的综合评分
色谱条件进样测定，记录峰面积。采用Origin 2018软件
Tab 4 Comprehensive score of different extraction
绘制其HPLC叠加特征图谱，详见图1；浸出物特征峰总
technologies of A. pilosa extract
峰面积见表 3。如图 1、表 3 所示，在不同体积分数乙醇
提取方法 提取溶剂 浸出物含量得分 特征峰峰面积得分 过滤速度得分 综合评分
提取条件下，冷浸法和热浸法所得仙鹤草浸出物的主要
冷浸法 水 68.4 16.4 10.0 35.9
色谱峰个数均基本一致；以水为提取溶剂时，所得部分 50％乙醇 94.8 86.1 60.0 84.4
浸出物的色谱峰无法检出，且特征峰总峰面积存在较大 75％乙醇 82.1 89.2 80.0 84.5
95％乙醇 54.6 41.3 95.0 57.4
差异；此外，不同溶剂热浸法较之于相应溶剂冷浸法提
热浸法 水 88.1 34.3 20.0 53.0
取所得浸出物的特征峰总峰面积更高，且相同提取方 50％乙醇 100.0 100.0 70.0 94.0
法、不同溶剂提取所得浸出物的特征峰总峰面积排序均 75％乙醇 88.5 96.4 85.0 91.0
为50％乙醇＞75％乙醇＞95％乙醇＞水。 95％乙醇 64.5 69.1 100.0 73.4
2.2.4 仙鹤草浸出物提取工艺优化 以浸出物的含量、 2.3 仙鹤草药材HPLC特征图谱的建立
浸出物特征峰总峰面积再结合过滤速度（即浸出物提取 2.3.1 HPLC 特征图谱的生成 取 15 批仙鹤草药材粉
液用干燥滤器滤过的快慢）为评价指标，采用综合加权 末，按“2.1.2②”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1.1”
评分法进行仙鹤草浸出物提取工艺评价。分别计算浸 项下色谱条件进样测定，记录色谱图，使用《中药色谱指
出物含量、特征峰总峰面积、过滤速度的得分（某指标得 纹图谱相似度评价软件（2012版）》进行共有峰匹配。以
分＝该指标测定值/该指标最大值×100），并拟定浸出物 编号为 S1 的仙鹤草药材的色谱图为参照图谱，将时间
含量、特征峰总峰面积、过滤速度的权重分别为0.4、0.4、 窗宽度设为 0.1 min，采用多点校正法进行色谱峰匹配，

中国药房 2020年第31卷第24期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 24 ·3015 ·