Page 58 - 《中国药房》2020年第24期

r/min 离心 5 min，收集细胞沉淀，再用磷酸盐缓冲液 表 3 人参总皂苷对 PC12 衰老细胞周期分布的影响
（PBS，pH 7.2）漂洗2次，再按照FITC-Annexin Ⅴ凋亡检 （x±±s，n＝3，，％％）
测细胞试剂盒说明书进行操作，使用流式细胞仪在激发 Tab 3 Effects of total ginsenosides on cell cycle distri-
波长488 nm处检测细胞凋亡情况并计算凋亡率：凋亡率 bution of PC12 senescent cells（x±±s，n＝3，，％％）
＝早期细胞凋亡率+晚期细胞凋亡率。结果，正常对照 组别 G1期细胞比例 S期细胞比例 G2期细胞比例
组、模型组和人参总皂苷低、高浓度组细胞的凋亡率分 正常对照组 32.53±0.94 34.47±0.80 13.80±1.53
模型组 39.75±1.10 ＊＊ 29.26±0.85 ＊＊ 15.78±1.05
别 为（15.85 ± 1.54）％ 、（21.33 ± 1.06）％ 、（12.76 ± 人参总皂苷低浓度组 35.50±0.75 ## 31.40±1.34 16.68±0.96
1.89）％、（11.15±2.48）％（n＝3）。与正常对照组比较， 人参总皂苷高浓度组 36.49±0.82 ## 31.72±1.19 # 17.28±1.11
＊＊
#
##
模型组细胞的凋亡率显著增加（P＜0.05）；与模型组比 注：与空白组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.05，P＜0.01
#
##
＊＊
较，人参总皂苷低、高浓度组细胞凋亡率均显著降低 Note：vs. blank group， P＜0.01；vs. model group，P＜0.05，P＜
0.01
（P＜0.01），详见图2（图中，R2是正常细胞，R3是晚期凋
1 000 r/min离心5 min，收集沉淀，用PBS轻轻洗涤2次，
亡细胞，R4是坏死细胞，R5是早期凋亡细胞）。
在避光条件下，每孔加入罗丹明123染色工作液500 μL，
1×10 6 1×10 6
使其终浓度为 1～2 μmol/L，轻轻混匀，于 37 ℃孵育 30
1×10 5 1×10 5
min，弃去上清液，用 PBS 轻轻洗涤 2 次，用流式细胞仪
1×10 4 1×10 4 检测细胞 MMP，结果以各组与正常对照组的比值表
PI PI
1×10 3 1×10 3 示。试验重复3次。结果，与正常对照组比较，模型组细
100 100 胞 MMP 显著降低（P＜0.05）；与模型组比较，人参总皂
0 0
－100 －100 苷低、高浓度组细胞 MMP 均显著升高（P＜0.01），详见
－100 100 1×10 1×10 1×10 1×10 6 －100 100 1×10 1×10 1×10 1×10 6
5
4
3
4
3
5
Annexin Ⅴ Annexin Ⅴ 图3。
A.正常对照组 B.模型组
150
1×10 6 1×10 6
##
1×10 5 1×10 5
##
100
1×10 4 1×10 4 ＊
PI PI ％
1×10 3 1×10 3 MMＰ，
100 100 50
0 0
－100 －100
5
5
4
3
4
－100 100 1×10 1×10 1×10 1×10 6 －100 100 1×10 1×10 1×10 1×10 6
3
Annexin Ⅴ Annexin Ⅴ 0
C.人参总皂苷低浓度组 D.人参总皂苷高浓度组 正常对照组 模型组 人参总皂苷 人参总皂苷
低浓度组 高浓度组
图 2 人参总皂苷对 PC12 衰老细胞凋亡率影响的流式
注：与正常对照组，P＜0.05；与模型组比较，P＜0.01
##
＊
细胞图
#
Note：vs. normal control group， P＜0.05；vs. model group，P＜
＊
Fig 2 Flow cytometries of the effects of total ginse-
0.01
nosides on apoptotic rate of PC12 senescent cells
图 3 人 参 总 皂 苷 对 PC12 衰 老 细 胞 MMP 的 影 响
2.6 人参总皂苷对PC12衰老细胞周期的影响 （n＝3）
采用流式细胞术检测。按“2.5”项下方法分组、培 Fig 3 Effects of total ginsenosides on MMP of PC12
养、处理至“PBS漂洗2次”，随后加入4 ℃ 75％乙醇固定 senescent cells（n＝3）
过夜，再用 4 ℃PBS 洗涤 2 次，1 000 r/min 离心 5 min，根 2.8 细胞内ATP含量检测
据细胞周期试剂盒说明书方法配制碘化丙啶（PI）染色 按“2.4”项下方法分组、培养。培养 24 h 后，弃去培
试剂，在37 ℃避光温浴30 min后，用流式细胞仪分析细 养基，加入 RIPA 裂解液 200 μL，4 ℃下 1 000 r/min 离心
胞周期。试验重复3次。结果，与正常对照组比较，模型 5 min，取上清液用于后续的检测。根据 ATP 检测试剂
组 G1细胞比例显著升高，S 期细胞比例显著降低（P＜ 盒说明书步骤进行操作，使用酶标仪检测 ATP 含量，结
0.01），而 G2期细胞比例组间比较差异均无统计学意义 果以各组与正常对照组的比值表示。结果，与正常对照
组比较，模型组细胞内ATP含量显著降低（P＜0.01）；与
（P＞0.05）。与模型组比较，人参总皂苷低、高浓度组G1
期细胞比例显著降低（P＜0.01），人参总皂苷高浓度组S 模型组比较，人参总皂苷高浓度组细胞内ATP含量显著
期细胞比例显著升高（P＜0.05），详见表3。 升高（P＜0.01），详见图4。
2.7 线粒体膜电位（MMP）检测 2.9 细胞中ROS含量检测
采用流式细胞术检测。按“2.4”项下方法分组、培 采用 DCFH-DA 荧光探针法检测。按“2.4”项下方
养。培养 24 h 后，弃去培养基，细胞用胰蛋白酶消化， 法分组、培养。培养24 h后，弃去培养基，加入胰蛋白酶
·2996 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 24 中国药房 2020年第31卷第24期