Page 57 - 《中国药房》2020年第24期

2.2 D-半乳糖对PC12细胞活力的影响 为便于试验延续，选择 55、65 μg/mL 作为后续试验中人
采用CCK-8法检测。取对数生长期的PC12细胞按 参总皂苷的给药浓度。
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1.6×10 个/L、200 μL/孔接种于 96 孔板中。试验设空白 表 2 人参总皂苷对 PC12 衰老细胞存活率的影响（x±±
组、正常对照组和模型组，每组设6个复孔。空白组不含 s，n＝3）
细胞和药物；正常对照组细胞用完全培养液（RPMI 1640 Tab 2 Effects of total ginsenosides on survival rate of
培养基+10％胎牛血清+1％青霉素-链霉素双抗）培养； PC12 senescent cells（x±±s，n＝3）
模型组细胞用 D-半乳糖终质量浓度分别为 5、10、20、 组别 质量浓度，μg/mL 细胞存活率，％
30、40 mg/mL 的完全培养液分别在 37 ℃、5％CO2培养 正常对照组 100.00±7.48
模型组 63.49±3.39 ＊＊
箱中培养24 h后，更换完全培养液继续培养24 h。每孔 药物组 1 72.17±17.95
加入CCK-8工作液20 μL，振荡混匀，继续培养0.5 h后， 2 73.73±10.52
使用酶标仪于 450 nm 波长处检测各孔的吸光度（A）值 4 79.85±6.51
8 87.02±7.33 ##
并计算细胞存活率：细胞存活率（％）＝（试验组 A 值－
16 87.52±4.92 ##
空白组 A 值）/（正常对照组 A 值－空白组 A 值）×100％。 32 93.03±8.20 ##
试验重复 3 次。采用 GraphPad Prism 6 软件进行统计分 64 96.95±8.13 ##
##
＊＊
析；数据以 x±s 表示，组间比较采用单因素方差分析； 注：与正常对照组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.01
Note：vs. normal control group， ＊ ＊ P＜0.01；vs. model group，
P＜0.05 表示差异有统计学意义（统计方法下同）。结
## P＜0.01
果，当D-半乳糖质量浓度为20 mg/mL及以上时，细胞存
2.4 人参总皂苷对PC12衰老细胞数的影响
活率显著低于正常对照组（P＜0.01），详见表 1。因此，
采用β-半乳糖苷酶染色检测。取对数生长期的
选取对 P12 细胞起毒性作用的临界浓度 20 mg/mL 作为
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PC12细胞按4×10 个/L、2 mL/孔接种于6孔板中。试验
后续试验中D-半乳糖的干预浓度。
设正常对照组、模型组和药物组，除药物组中人参总皂
表1 D-半乳糖对PC12细胞存活率的影响（x±±s，n＝3）
苷终质量浓度分别为 55、65 μg/mL（分别记为人参总皂
Tab 1 Effects of D-galactose on survival rate of PC12
苷低、高浓度组，下同）外，其余处理、培养条件均与“2.3”
cells（x±±s，n＝3）
项相同。培养24 h后，按照细胞衰老β-半乳糖苷酶染色
组别 质量浓度，mg/mL 细胞存活率，％ 试剂盒说明书进行染色，在倒置显微镜下观察并对蓝色
正常对照组 96.71±8.03
模型组 5 96.96±2.07 衰老阳性细胞进行计数。结果，与正常对照组比较，D-
10 86.53±4.47 半乳糖处理过的P12细胞中衰老细胞数明显增加；经人
20 66.65±12.52 ＊＊ 参总皂苷处理后，各药物组的衰老细胞数均较模型组明
30 48.32±4.45 ＊＊
40 32.59±2.77 ＊＊ 显减少，详见图1。
＊＊
注：与正常对照组比较， P＜0.01
Note：vs. normal control group， P＜0.01
＊＊
2.3 人参总皂苷对PC12衰老细胞活力的影响
采用CCK-8法检测。取对数生长期的PC12细胞按
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1.6×10 个/L、200 μL/孔接种于 96 孔板中。试验设空白 A.正常对照组 B.模型组
组、正常对照组、模型组和药物组，每组设6个复孔。空
白组和正常对照组均按“2.2”项下方法处理培养；模型组
和药物组细胞用含20 mg/mL D-半乳糖的完全培养液培
养24 h后，药物组细胞再加入人参总皂苷终质量浓度分
别为 1、2、4、8、16、32、64 μg/mL（给药浓度按预试验设 C.人参总皂苷低浓度组 D.人参总皂苷高浓度组
置）的完全培养液继续培养 24 h。然后按“2.2”项下“每 图1 人参总皂苷对PC12衰老细胞数影响的显微图（β-
孔加入CCK-8工作液20 μL”起进行操作，同法检测各孔 半乳糖苷酶染色法，×200）
的A值并计算细胞存活率和半数效应浓度（EC50 ）。试验 Fig 1 Micrographs of the effects of total ginsenosides
重复3次。结果，与正常对照组比较，模型组细胞存活率 on the number of PC12 senescent cells（β-galac-
显著降低（P＜0.01）。与模型组比较，人参总皂苷能提 tosidase staining，×200）
高PC12衰老细胞的存活率，并随着给药浓度的增加，细 2.5 人参总皂苷对PC12衰老细胞凋亡率的影响
胞存活率也有增加趋势，其中当质量浓度为 8 μg/mL 及 采用流式细胞术检测。取对数生长期的PC12细胞
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以上时，组间比较差异均有统计学意义（P＜0.01），详见 按 4×10 个/L、2 mL/孔接种于 6 孔板中。按“2.4”项下方
表2。人参总皂苷对PC12衰老细胞的EC50为65 μg/mL， 法分组、培养。培养 24 h 后，加入胰蛋白酶消化，1 000

中国药房 2020年第31卷第24期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 24 ·2995 ·