Page 49 - 《中国药房》2020年23期

increased significantly （P＜0.05）. Compared with model rats，the infarction area of cerebral tissue in each dose group of
chrysophanol was reduced to different extent；the number of Iba-1 positive cells in ischemic penumbra was decreased；neurological
impairment score，the percentage of cerebral infarction area，relative expression of Notch-1，TNF-α and ICAM-1 protein were
significantly decreased（P＜0.05 or P＜0.01）. CONCLUSIONS：Chrysophanol has a certain protective effect on the brain tissue of
cerebral ischemia model rats，and can relieve the nerve injury. Its mechanism may be associated with inhibiting the activation of
microglia and expression of inflammatory factors mediated by Notch pathway.
KEYWORDS Cerebral ischemia；Chrysophanol；Microglia；Inflammation factor；Notch signaling pathway；Rats

脑卒中是世界范围内导致患者残疾和死亡的主要 型全自动化学发光分析仪（上海天能科技有限公司）；
原因，其中缺血性卒中约占总卒中病例的 60％～80％， TB-718D型生物组织包埋机（泰维科技实业股份有限公
具有发病率高、致残率高和病死率高等特点，给患者家 司）；DHG-9023A 型恒温烘箱（上海恒一科学仪器有限
庭和社会带来了沉重的负担 。卒中后的脑损伤是由一 公司）；EOS 1300D/1500D 型单反相机（日本 Cannon 公
[1]
系列复杂的病理生理事件（如兴奋性氨基酸毒性损伤、 司）。
钙调节障碍、氧化应激、炎症细胞浸润和细胞凋亡等）所 1.2 药品与试剂
[2]
导致的不可逆的神经细胞凋亡 。缺血后炎症反应已被 大黄酚原料药[上海源叶生物科技有限公司，批号：
认为是缺血性卒中关键的病理生理学因素，其中小胶质 T18S10F97987，纯度：≥98％；以 N，N-二甲基甲酰胺-聚
细胞作为中枢神经系统（CNS）炎症反应的主要效应器， 山梨酯80-生理盐水（体积比为1∶1∶8）混合溶液为溶剂，
在缺血性卒中后可通过形态和表型改变而迅速活化，活 配制成0.1％、0.01％、0.001％大黄酚药液，备用]；小鼠抗
化后的小胶质细胞可介导促进脑损伤恢复的有益活动， 大鼠小胶质细胞/巨噬细胞特异性蛋白抗体Iba-1多克隆
例如吞噬细胞碎片和分泌抗炎物质、神经生长因子 抗体（美国 GeneTex 公司，批号：GT10312）；异硫氰酸荧
[3]
等 。但是在缺血性卒中的急性阶段，小胶质细胞活化 光素（FITC）标记的驴抗小鼠 IgG 二抗（武汉三鹰生物
被认为是继发性损伤的潜在原因，其可通过释放炎症因 技术有限公司，批号：SA00003-9）；兔抗小鼠 ICAM-1、
子[如细胞间黏附分子 1（ICAM-1）、肿瘤坏死因子α TNF-α、Notch-1多克隆抗体和兔抗小鼠β-actin单克隆抗体
（TNF-α）等]而导致脑组织损害 。最近的研究表明， （武汉贝茵莱生物科技有限公司，批号分别为PAB31662、
[4]
Notch 信号在小胶质细胞中呈高表达，其信号转导可在 PAB37416、PAB44149、WB9111-MAB43672）；细胞核蛋
脑损伤后被激活；同时，Notch信号也参与了小胶质细胞 白与细胞浆蛋白抽提试剂盒（上海碧云天生物技术有限
活化后神经炎症介质的释放，与脑缺血后炎症反应的发 公司，批号：P0028-1）；封闭用山羊血清、BCA 蛋白定量
[5]
生密切相关 。由此可见，抑制脑缺血后Notch信号转导 试剂盒、辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗兔IgG二抗、
以及活化小胶质细胞诱导的炎症因子表达有望成为防 抗荧光衰减封片剂（北京索莱宝科技有限公司，批号分
治缺血性卒中的有效策略。 别为SL038、PC0020、P8020、S2110）；PVDF膜（美国Mil-
大黄酚（Chrysophanol）是从大黄属植物中分离出来 lipore 公司，批号：IPVH00010）；2，3，5-氯化三苯基四氮
的重要的游离蒽醌化合物之一，具有抗炎、改善脂质代 唑（TTC）染色液（北京奥博特生物科技有限公司）；氯化
谢、抗抑郁、抗心肌缺血、保护脑组织等广泛的药理活 钠注射液（贵州科伦药业有限公司，批号：国药准字
性 [6-7] 。既往研究表明，大黄酚可拮抗脑缺血/再灌注损 H20033974，规格：100 mL∶900 mg；作生理盐水用）；ECL
伤，抑制小胶质细胞介导的炎症因子[白细胞介素 6 化学发光底物（环亚生物科技有限公司）；4′，6-联脒-2-苯
（IL-6）、IL-1β]释放而减轻炎症损伤 。但大黄酚抑制小 基吲哚（DAPI）染料（美国Sigma公司，批号：24894305）；
[8]
胶质细胞活化是否与 Notch 信号通路调控相关，尚未见 其余试剂均为市售分析纯，水为蒸馏水。
相关报道。基于此，本研究拟使用改良线栓法制作脑缺 1.3 动物
血损伤大鼠模型，初步探讨大黄酚对模型大鼠脑缺血后 清洁级 SD 大鼠，雌雄各半，体质量（250±20）g，由
Notch 信号通路以及小胶质细胞活化、炎症因子表达的 长沙市天勤生物技术有限公司提供，动物生产许可证
影响，为中药及其活性成分治疗缺血性卒中筛选新的靶 号：SCXK（湘）2014-0011。所有雌雄大鼠均自由摄食饮
点，并为将大黄酚开发为神经保护药物提供理论依据。 水，并分笼饲养于温度22～25 ℃、湿度40％～60％的环
1 材料 境中，适应性饲养1周后用于实验。
1.1 仪器 2 方法
DMIL LED 型荧光显微镜（德国 Leica 公司）；Mini 2.1 分组、造模与给药
Protean 3 Cell型电泳仪（美国Bio-Rad公司）；Tanon-5200 将大鼠随机分为假手术组、模型组以及大黄酚高、

中国药房 2020年第31卷第23期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 23 ·2859 ·