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表 3 L-SHK 联合 DDP 对 HeLa/DDP 细胞凋亡率的影 发现 GBM 细胞的增殖和迁移能力均有所减弱,基质金
响(x±±s,n=3,%%) 属蛋白酶 2(MMP-2)、MMP-9 的表达均明显下调,并可
Tab 3 Effects of L-SHK combined with DDP on the 通过抑制磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶 B(PI3K/Akt)信
apoptosis rate of HeLa/DDP cells(x ±± s,n= 号通路来减少GBM的复发 。Wang Y等 在研究SHK
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3,%%) 抗膀胱癌的作用机制时发现,与DDP单用相比,SHK与
组别 早期凋亡率 晚期凋亡率 总调亡率 DDP联用对肿瘤细胞的杀伤效果更显著,作用机制可能
空白对照组 2.87±0.68 0.10±0.01 2.97±0.58
DDP组 3.08±0.46 0.11±0.01 3.20±0.43 与SHK可逆转膀胱癌细胞的DDP耐药有关。有研究显
DDP+低剂量L-SHK组 5.57±0.52 *# 0.53±0.33 *# 6.10±0.65 *# 示,L-SHK 可提高 EGFR 基因野生型非小细胞肺癌
DDP+中剂量L-SHK组 8.50±0.63 *# 1.23±0.47 *# 9.73±0.69 *# (NSCLC)患者应用厄洛替尼/吉非替尼的抗癌效果,且
DDP+高剂量L-SHK组 19.90±1.26 *# 3.93±0.72 *# 23.83±1.03 *#
联用效果优于任一药物单用,其机制可能为通过激活活
注:与空白对照组比较,P<0.05;与DDP组比较,P<0.05
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Note:vs. blank control group,P<0.05;vs. DDP group,P<0.05 性氧(ROS)介导的内质网应激而诱导肿瘤细胞凋亡 。
基于上述文献和本课题前期工作,本研究首先建立
Bcl-2
了 DDP 耐药 HeLa 细胞模型,发现 DDP 对 HeLa/DDP 细
胞的 IC50值为(35.82±0.34)mg/L,显著高于其对 HeLa
Bax
细胞的(3.04±0.43)mg/L;其耐药指数为11.8,提示该细
Cleaved caspase-3 胞耐药性为中等。本研究进一步探讨了不同剂量
L-SHK 对 HeLa/DDP 细胞增殖的抑制和耐药逆转作
β-actin
用。结果显示,不同剂量L-SHK对HeLa/DDP细胞的抑
空白对照组 DDP组 DDP+低剂量 DDP+中剂量 DDP+高剂量 制作用有随剂量增加而逐渐增强的趋势;与DDP单用相
L-SHK组 L-SHK组 L-SHK组
图 4 L-SHK 联合 DDP 对 HeLa/DDP 细胞凋亡相关蛋 比,联用低、中、高剂量 L-SHK 后,其对 HeLa/DDP 细胞
白表达影响的电泳图 的IC50值均显著降低,且具有剂量依赖性;其逆转倍数分
Fig 4 Electrophoretograms of the effects of L-SHK 别为 1.38、2.80、6.71,提示 L-SHK 具有一定的耐药逆转
combined with DDP on expression of apopto- 活性。
sis-related proteins in HeLa/DDP cells 前期研究结果显示,L-SHK 与 DDP 联用可明显抑
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表 4 L-SHK 联合 DDP 对 HeLa/DDP 细胞凋亡相关蛋 制HeLa细胞增殖、促进细胞凋亡 。在此基础上,本研
白表达量的影响(x±±s,n=3) 究进一步探讨了 L-SHK 与 DDP 联用对 HeLa/DDP 细胞
Tab 4 Effects of L-SHK combined with DDP on ex- 周期及凋亡情况的影响。结果显示,与空白对照组比
pression amount of apoptosis-related proteins 较,各药物组 G0/G1期、S 期细胞比例以及各剂量 L-SHK
in HeLa/DDP cells(x±±s,n=3) 联用组细胞早期、晚期凋亡率及总凋亡率均显著升高,
组别 Bcl-2 Bax Cleaved caspase-3 各 药 物 组 G2/M 期 细 胞 比 例 均 显 著 降 低 ;且 各 剂 量
空白对照组 0.82±0.06 0.45±0.02 0.12±0.00 L-SHK 联用组 G0/G1期细胞比例以及早期、晚期凋亡率
DDP组 0.79±0.03 0.44±0.03 0.14±0.00
DDP+低剂量L-SHK组 0.70±0.04 *# 0.58±0.02 *# 0.23±0.01 *# 及总凋亡率均显著高于 DDP 组,S 期、G2/M 期细胞比例
DDP+中剂量L-SHK组 0.69±0.04 *# 0.78±0.03 *# 0.75±0.03 *# 均显著低于 DDP 组。这提示与单用 DDP 比较,联用
DDP+高剂量L-SHK组 0.38±0.02 *# 0.93±0.05 *# 0.78±0.02 *#
L-SHK 可抑制细胞周期由 G0/G1期向 S 期、G2/M 期的转
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注:与空白对照组比较,P<0.05;与DDP组比较,P<0.05
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换,从而促进细胞凋亡。
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Note:vs. blank control group,P<0.05;vs. DDP group,P<0.05
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为进一步研究 L-SHK 促进 HeLa/DDP 细胞凋亡的
细胞的耐药性 [9-12] ,这一发现使得肿瘤治疗领域的研究
可能机制,本研究采用Western blotting法检测了凋亡相
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有了新的突破。Shilnikova K 等 研究了 L-SHK 对 DDP
关蛋白的表达情况。促进细胞凋亡是抗肿瘤药物发挥
耐药的人卵巢癌 A2780 细胞(A2780-CR)的毒性和迁移
治疗效果的重要途径之一,且在凋亡过程中均伴有Cas-
抑制作用,发现该化合物可增加耐药细胞线粒体膜去极 pase-3 家族的激活;该家族激活后,Caspase-3 转变为
化、上调上皮细胞钙黏蛋白表达、下调神经元钙黏蛋白 Cleaved caspase-3,后者表达越多,则表明细胞凋亡比例
表达,从而降低A2780-CR细胞的迁移能力,抑制该细胞 越高 。Bcl-2和Bax是细胞凋亡的重要调节因子,其中
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的上皮间质转化。替莫唑胺(TMZ)是胶质母细胞瘤 Bcl-2发挥抗凋亡作用,而Bax发挥促凋亡作用 。本研
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(GBM)常用的化疗药物,但其严重的耐药性影响了 究结果显示,与空白对照组和 DDP 组比较,各剂量
GBM的治疗效果;将SHK、TMZ联合处理GBM细胞后, L-SHK 联用组细胞中 Bcl-2 蛋白的表达量均显著降低,
·1872 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 15 中国药房 2020年第31卷第15期