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表 3 L-SHK 联合 DDP 对 HeLa/DDP 细胞凋亡率的影                 发现 GBM 细胞的增殖和迁移能力均有所减弱,基质金
              响(x±±s,n=3,%%)                                属蛋白酶 2(MMP-2)、MMP-9 的表达均明显下调,并可
        Tab 3 Effects of L-SHK combined with DDP on the     通过抑制磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶 B(PI3K/Akt)信
               apoptosis rate of HeLa/DDP cells(x ±± s,n=   号通路来减少GBM的复发 。Wang Y等 在研究SHK
                                                                                               [11]
                                                                                   [8]
               3,%%)                                        抗膀胱癌的作用机制时发现,与DDP单用相比,SHK与
        组别              早期凋亡率        晚期凋亡率       总调亡率       DDP联用对肿瘤细胞的杀伤效果更显著,作用机制可能
        空白对照组            2.87±0.68   0.10±0.01   2.97±0.58
        DDP组             3.08±0.46   0.11±0.01   3.20±0.43  与SHK可逆转膀胱癌细胞的DDP耐药有关。有研究显
        DDP+低剂量L-SHK组    5.57±0.52 *#  0.53±0.33 *#  6.10±0.65 *#  示,L-SHK 可提高 EGFR 基因野生型非小细胞肺癌
        DDP+中剂量L-SHK组    8.50±0.63 *#  1.23±0.47 *#  9.73±0.69 *#  (NSCLC)患者应用厄洛替尼/吉非替尼的抗癌效果,且
        DDP+高剂量L-SHK组   19.90±1.26 *#  3.93±0.72 *#  23.83±1.03 *#
                                                            联用效果优于任一药物单用,其机制可能为通过激活活
            注:与空白对照组比较,P<0.05;与DDP组比较,P<0.05
                            *
                                             #
                                                                                                        [17]
                                                #
                               *
            Note:vs. blank control group,P<0.05;vs. DDP group,P<0.05  性氧(ROS)介导的内质网应激而诱导肿瘤细胞凋亡 。
                                                                基于上述文献和本课题前期工作,本研究首先建立
                Bcl-2
                                                            了 DDP 耐药 HeLa 细胞模型,发现 DDP 对 HeLa/DDP 细
                                                            胞的 IC50值为(35.82±0.34)mg/L,显著高于其对 HeLa
                Bax
                                                            细胞的(3.04±0.43)mg/L;其耐药指数为11.8,提示该细
         Cleaved caspase-3                                  胞耐药性为中等。本研究进一步探讨了不同剂量
                                                            L-SHK 对 HeLa/DDP 细胞增殖的抑制和耐药逆转作
               β-actin
                                                            用。结果显示,不同剂量L-SHK对HeLa/DDP细胞的抑
                   空白对照组   DDP组  DDP+低剂量  DDP+中剂量  DDP+高剂量  制作用有随剂量增加而逐渐增强的趋势;与DDP单用相
                                  L-SHK组  L-SHK组  L-SHK组
        图 4   L-SHK 联合 DDP 对 HeLa/DDP 细胞凋亡相关蛋               比,联用低、中、高剂量 L-SHK 后,其对 HeLa/DDP 细胞
              白表达影响的电泳图                                     的IC50值均显著降低,且具有剂量依赖性;其逆转倍数分
        Fig 4 Electrophoretograms of the effects of L-SHK   别为 1.38、2.80、6.71,提示 L-SHK 具有一定的耐药逆转
               combined with DDP on expression of apopto-   活性。
               sis-related proteins in HeLa/DDP cells           前期研究结果显示,L-SHK 与 DDP 联用可明显抑
                                                                                         [15]
        表 4   L-SHK 联合 DDP 对 HeLa/DDP 细胞凋亡相关蛋               制HeLa细胞增殖、促进细胞凋亡 。在此基础上,本研
              白表达量的影响(x±±s,n=3)                             究进一步探讨了 L-SHK 与 DDP 联用对 HeLa/DDP 细胞
        Tab 4  Effects of L-SHK combined with DDP on ex-    周期及凋亡情况的影响。结果显示,与空白对照组比
               pression amount of apoptosis-related proteins  较,各药物组 G0/G1期、S 期细胞比例以及各剂量 L-SHK
               in HeLa/DDP cells(x±±s,n=3)                  联用组细胞早期、晚期凋亡率及总凋亡率均显著升高,
        组别                Bcl-2        Bax     Cleaved caspase-3  各 药 物 组 G2/M 期 细 胞 比 例 均 显 著 降 低 ;且 各 剂 量
        空白对照组            0.82±0.06   0.45±0.02  0.12±0.00   L-SHK 联用组 G0/G1期细胞比例以及早期、晚期凋亡率
        DDP组             0.79±0.03   0.44±0.03  0.14±0.00
        DDP+低剂量L-SHK组    0.70±0.04 *#  0.58±0.02 *#  0.23±0.01 *#  及总凋亡率均显著高于 DDP 组,S 期、G2/M 期细胞比例
        DDP+中剂量L-SHK组    0.69±0.04 *#  0.78±0.03 *#  0.75±0.03 *#  均显著低于 DDP 组。这提示与单用 DDP 比较,联用
        DDP+高剂量L-SHK组    0.38±0.02 *#  0.93±0.05 *#  0.78±0.02 *#
                                                            L-SHK 可抑制细胞周期由 G0/G1期向 S 期、G2/M 期的转
                                             #
            注:与空白对照组比较,P<0.05;与DDP组比较,P<0.05
                            *
                                                            换,从而促进细胞凋亡。
                                                #
            Note:vs. blank control group,P<0.05;vs. DDP group,P<0.05
                               *
                                                                为进一步研究 L-SHK 促进 HeLa/DDP 细胞凋亡的
        细胞的耐药性       [9-12] ,这一发现使得肿瘤治疗领域的研究
                                                            可能机制,本研究采用Western blotting法检测了凋亡相
                                    [7]
        有了新的突破。Shilnikova K 等 研究了 L-SHK 对 DDP
                                                            关蛋白的表达情况。促进细胞凋亡是抗肿瘤药物发挥
        耐药的人卵巢癌 A2780 细胞(A2780-CR)的毒性和迁移
                                                            治疗效果的重要途径之一,且在凋亡过程中均伴有Cas-
        抑制作用,发现该化合物可增加耐药细胞线粒体膜去极                            pase-3 家族的激活;该家族激活后,Caspase-3 转变为
        化、上调上皮细胞钙黏蛋白表达、下调神经元钙黏蛋白                            Cleaved caspase-3,后者表达越多,则表明细胞凋亡比例
        表达,从而降低A2780-CR细胞的迁移能力,抑制该细胞                        越高 。Bcl-2和Bax是细胞凋亡的重要调节因子,其中
                                                                [18]
        的上皮间质转化。替莫唑胺(TMZ)是胶质母细胞瘤                            Bcl-2发挥抗凋亡作用,而Bax发挥促凋亡作用 。本研
                                                                                                    [19]
        (GBM)常用的化疗药物,但其严重的耐药性影响了                            究结果显示,与空白对照组和 DDP 组比较,各剂量
        GBM的治疗效果;将SHK、TMZ联合处理GBM细胞后,                        L-SHK 联用组细胞中 Bcl-2 蛋白的表达量均显著降低,

        ·1872  ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 15                                中国药房    2020年第31卷第15期
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