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2.2 造模、分组与给药                                        凝胶电泳分离目的蛋白（其中浓缩胶电压为 70 V，电泳
            小鼠适应性饲养 1 周后，随机取 60 只小鼠，一次性                     时间为 40 min；分离胶电压为 120 V，电泳时间约为 1.5
        腹腔注射以柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液（0.1 mol/L，pH 4.4）                  h），然后电转（电流为120 mA，时间为2 h）至硝酸纤维素

        新鲜配制的 STZ溶液（60 mg/kg），复制糖尿病模型。注                     膜上；用牛奶封闭 1 h，分别加入稀释比例均为 1 ∶ 2 000
        射3 d后，小鼠尾静脉取血并用血糖仪测定FBG含量，糖                         的PI3K、p-AKT、GLUT4和β-actin一抗，在4 ℃条件下孵
        尿病小鼠模型成功建立的标准为FBG＞16.7 mmol/L 。                     育过夜；以 TBST 漂洗 3 次后，加入相应二抗（稀释比例
                                                     [12]
        剩余10只健康小鼠作为正常组，注射等体积、同浓度和                           为 1 ∶ 5 000），在常温下继续孵育 40 min；以 TBST 漂洗 3
        pH 的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液。共有 43 只小鼠造模成                        次，加入 ECL 试剂显色。采用凝胶成像系统显影后，以
        功。选取造模成功的40只小鼠随机分为模型组、二甲双                           Image J v1.8.0软件分析各条带灰度值，以目的蛋白条带
        胍组（阳性对照，200 mg/kg）和紫苏叶多糖高、低剂量组                      灰度值与内参β-actin 条带灰度值的比值表示目的蛋白
        （400、200 mg/kg），每组 10 只。正常组和模型组小鼠灌                  的相对表达水平。
        胃等体积生理盐水，各给药组小鼠灌胃相应药物，灌胃                            2.8 统计学方法
        体积均为0.2 mL/10 g，每天给药1次，连续给药28 d。其                       采用SPSS 18.0统计学软件进行数据分析。结果以
                                                  [13]
        中，二甲双胍组小鼠的给药剂量是参考文献方法 设置                            x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，方差齐时
                                          [14]
        的，紫苏叶多糖的剂量是参考文献方法 并结合预实验                            组间两两比较采用 Bonferroni 法，方差不齐时组间两两
        结果设置的。
                                                            比较采用 Nemenyi 法。P＜0.05 表示差异具有统计学
        2.3  小鼠一般情况及体质量测定                                   意义。
            实验期间，每日观察各组小鼠行为活动、精神状态、
                                                            3 结果
        毛色、大小便量、进食量及饮水量等情况，并在给药前及
                                                            3.1  紫苏叶多糖对糖尿病模型小鼠一般状况及体质量
        末次给药后分别称定小鼠的体质量。
                                                            的影响
        2.4  小鼠口服葡萄糖耐量实验
                                                                正常组小鼠行动活跃，精神状态良好，皮毛干燥光
            灌胃给药 21 d 后，各组小鼠禁食不禁水 12 h，随后
                                                            滑，大小便量、进食量及饮水量均正常；模型组小鼠行动
        灌胃 40％葡萄糖溶液（2 g/kg）。分别于灌胃糖溶液 0、
                                                            较迟缓，精神萎靡不振，毛发有不同程度的脱落或纠结
        30、60、120 min后，断尾取血并用血糖仪测定FBG含量。
                                                            成簇，大小便量增加，饲料消耗量和饮用水增多；二甲双
        2.5  小鼠血清中血糖、血脂相关指标测定
                                                            胍组和紫苏叶多糖高、低剂量组小鼠一般状况较模型组
            末次给药 12 h 后，各组小鼠摘眼球取血，以 3 000
                                                            均有一定程度的改善。给药前，各组小鼠的体质量差异
        r/min 离心 10 min，分离血清。采用血糖仪测定 FBG 含
                                                            均无统计学意义（P＞0.05）；灌胃给药28 d后，与正常组
        量，酶联免疫吸附法测定FINS含量，全自动生化分析仪
                                                            比较，模型组小鼠体质量显著降低（P＜0.05）；与模型组
        测定 HDL-C、LDL-C、TC、TG 含量。按公式计算胰岛素
                                                            比较，二甲双胍组和紫苏叶多糖高、低剂量组小鼠体质
        敏感指数（ISI）和胰岛素抵抗指数（IRI）：ISI＝ln（1/FBG×
                                                            量均有不同程度的升高，但差异均无统计学意义（P＞
        FINS）；IRI＝FBG×FINS/22.5。
                                                            0.05）。上述结果提示，紫苏叶多糖可以改善糖尿病模型
        2.6  小鼠胰腺组织中氧化应激水平测定
                                                            小鼠的一般状况，但对体质量并无明显影响。各组小鼠
            各组小鼠取血后处死，无菌操作分离其胰腺组织，
                                                            体质量测定结果见表1。
        将部分组织充分碾磨并经RIPA裂解液裂解后，以3 000
                                                               表1 各组小鼠体质量测定结果（x±±s，n＝10，g）
        r/min离心10 min，制备组织上清液。采用硫代巴比妥酸
                                                            Tab 1 Body weight of mice in each group（x±±s，n＝
        法测定 MDA 含量，黄嘌呤氧化酶法测定 SOD 活性，硫
                                                                   10，g）
        代硫酸钠法测定 CAT 活性，二硫对硝基苯甲酸法测定
        GSH-Px活性，具体操作按照相应试剂盒说明书进行。                          组别                      给药前             给药28 d后
                                                            正常组                    20.42±2.21       29.49±3.47
        2.7  小鼠胰腺组织中 PI3K、p-AKT、GLUT4 蛋白表达                  模型组                    19.97±2.56       22.63±3.12 ＊
        水平测定                                                二甲双胍组                  20.30±2.12       24.74±2.78
                                                            紫苏叶多糖高剂量组              20.69±2.65       24.25±3.54
            取各组小鼠另一部分胰腺组织，按“2.6”项下方法制                       紫苏叶多糖低剂量组              19.81±2.43       23.66±3.70
        备组织上清液，二喹啉甲酸（BCA）法测定总蛋白含量                              注：与正常组比较，P＜0.05
                                                                            ＊
        后，煮沸使蛋白变性。取蛋白20 μg，行12％聚丙烯酰胺                           Note：vs. normal group，P＜0.05
                                                                               ＊

        ·1876  ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 15                                中国药房    2020年第31卷第15期
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