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器有限公司）；Eclipse E100 型正置光学显微镜（日本 法操作，检测各组大鼠血清中 E2、T、FSH、LH、GSH-Px、
Nikon 公司）；BSA2245 型电子天平（德国 Sartorius 公 SOD、MDA、Scr、BUN水平。
司）；HM-SY96A型全自动酶标仪（山东食安生物科技有 2.4 各组大鼠脏器指数的检测
限公司）；Aperio A72 数字病理系统[徕卡显微系统（上 各组雄性大鼠取血后，摘取其胸腺、睾丸、附睾、精
海）贸易有限公司]。 囊腺、肾并称定质量，计算各脏器指数（脏器指数＝脏器
1.2 药品与试剂 湿质量/体质量）。
TFA[南京泽郎生物科技有限公司，含量：47.28％ 2.5 各组大鼠睾丸、附睾、肾组织病理学观察
（即每100 g沙苑子提取物含总黄酮47.28 g）]；五子衍宗 取“2.4”项下各组雄性大鼠的睾丸、附睾、肾组织适
丸（江西药都樟树制药有限公司，批号：20180415，规格： 量，置于 10％甲醛溶液中固定，脱水，石蜡包埋，切片
6 g/袋）；E2、T、FSH、LH、GSH-Px、SOD、MDA、Scr、BUN （3～5 µm），然后进行苏木精-伊红（HE）染色，在显微镜
酶联免疫吸附法（ELISA）试剂盒（苏州卡尔文生物科技 下观察上述组织的病理学变化。
有 限 公 司 ，批 号 分 别 为 ：E20181012A、E20181017A、 2.6 各组大鼠肾组织中凋亡相关蛋白表达水平的检测
E20181003A、E20181019A、E20181024A、E20181028A、 采用免疫组织化学法检测。取“2.5”项下各组雄性
E20180922A、E20181018A、E20181016A）；兔 抗 大 鼠 大鼠的肾组织切片，进行脱蜡，水化，抗原修复，以 10％
Bcl-2 多克隆抗体、兔抗大鼠 Bax 单克隆抗体、兔抗大鼠 山羊血清封闭抗原，加入 Bax、Caspase-3 单克隆抗体和
Caspase-3单克隆抗体、兔抗大鼠Caspase-9多克隆抗体（美 Bcl-2、Caspase-9 多克隆抗体（稀释比例分别为 1 ∶ 250、
国Abcam公司，批号分别为：ab32124、ab32503、ab13847、 1 ∶ 250、1 ∶ 500、1 ∶ 250），置于 4 ℃条件下孵育 18～24 h；
ab32539）；辣根过氧化物酶标记的羊抗兔免疫球蛋白 G 以PBS洗涤2 min×3次，加入二抗（稀释比例为1∶2 000），
二抗（北京力高泰科技有限公司，批号：ab205718）；其余 室温孵育 10 min；以 PBS 洗涤 10 min×2 次，二氨基联苯
试剂均为分析纯或实验室常用试剂，水为纯净水。
胺（DAB）显色，在显微镜下观察显色程度；以 PBS 洗涤
1.3 动物
5 min×3 次，苏木精复染，1％盐酸中分化，自来水冲洗，
清洁级雄性、雌性 SD 大鼠各 72 只，体质量 180～
乙醇梯度脱水，干燥，中性树脂封片。Aperio 数字病理
220 g，购于济南朋悦实验动物繁育有限公司，动物生产
系统扫描切片并拍照，利用Image-Pro Plus 6.0软件分析
许可证号：SCXK（鲁）20190003。
阳性染色部分的光密度值，用来表示 Bax、Bcl-2、Cas-
2 方法
pase-3、Caspase-9蛋白表达水平。
2.1 分组、造模与给药
2.7 统计学方法
取雄性大鼠适应性喂养7 d后，分为空白组（生理盐
采用SPSS 17.0软件对数据进行统计分析。计量资
水）、模型组（生理盐水）、阳性组（五子衍宗丸，2 g/kg，按
料以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间
人与大鼠体表面积折算，相当于人临床用药剂量的 10
两两比较采用 LSD 检验。P＜0.05 表示差异有统计学
倍）和 TFA 低、中、高剂量组（0.05、0.10、0.20 g/kg，给药
意义。
[9]
剂量参考文献方法 设置），每组 12 只。采用边给药边 3 结果
造模的方式，各组大鼠于每日上午 9：00 灌胃相应药物
3.1 各组大鼠精子质量评价结果
（生理盐水配制）；于同日下午 3：00，除空白组不作处理
与空白组比较，模型组雄性大鼠致雌鼠受孕率显著
外，其余各组大鼠灌胃腺嘌呤混悬液（200 mg/kg，以
降低（P＜0.01）；与模型组比较，阳性组和TFA低、中、高
0.5％羧甲基纤维素钠配制，临用现配）复制雄性大鼠生
剂量组雄性大鼠致雌鼠受孕率均显著升高（P＜0.05 或
殖功能障碍模型，连续给药 35 d [10-11] 。大约第 30 天时模
P＜0.01）。各组大鼠精子质量评价结果见表1。
型组大鼠出现反应迟钝、弓背、畏冷竖毛、尿量增加等情
表1 各组大鼠精子质量评价结果（n＝12）
况时，表明模型建立成功。
Tab 1 Quality evaluation of sperm in rats of each
2.2 各组大鼠精子质量评价
group（n＝12）
末次给药后，取雌性大鼠按1 ∶ 1比例与各组雄性大
鼠合笼交配，7 d 后取出雄性大鼠。雌性大鼠继续饲养 组别 剂量，g/kg 交配雌性大鼠，只 孕鼠，只 致雌鼠受孕率，％
空白组 11 9 81.8
14 d，并检测受孕率（受孕率＝受孕雌鼠数量/雌鼠总数 模型组 12 5 41.6 ＊＊
量），以评价雄性大鼠的精子质量。 阳性组 2 11 7 63.6 ##
2.3 各组大鼠血清中性激素、氧化应激、肾功能相关指 TFA低剂量组 0.05 10 5 50.0 #
TFA中剂量组 0.10 9 5 55.5 ##
标检测
TFA高剂量组 0.20 10 7 70.0 ##
各组雄性大鼠交配完毕取出后，腹腔注射10％水合
＊＊
#
##
注：与空白组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.05，P＜0.01
氯醛麻醉，腹主动脉取血 3 mL，于 4 ℃条件下以 3 000 Note：vs. blank group， P＜0.01；vs. model group，P＜0.05，P＜
#
##
＊＊
r/min离心15 min。取上清液，按ELISA试剂盒说明书方 0.01
·1856 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 15 中国药房 2020年第31卷第15期