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发现，其产地初加工工艺主要为清水洗后直接干燥（晴                           牙菜苦苷、龙胆苦苷质量浓度分别为 0.48、0.52、1.04
        天时采用晒干，阴天时采用阴干）；农户凭主观经验操                           mg/mL的混合对照品溶液，于4 ℃避光保存，备用。
                                                                                                  [17]
        作，随意性较大，缺乏系统性、标准化的初加工规范，导                          2.1.3  供试品溶液的制备          参考Zhang JY等 的方法，
        致药材中有效成分含量高低不一。相关研究发现，产地                           取滇龙胆阴干样品（取新鲜滇龙胆药材，洗净，阴干，即
        初加工工艺、水洗时间、干燥温度对龙胆苦苷的含量具                           得；下同）适量，打粉，过三号筛。取药材粉末0.2 g，置于
        有显著影响     [11-12] ，水洗阴干的滇龙胆中龙胆苦苷含量较                5 mL量瓶中，加入甲醇溶解并定容，混匀，称定质量，超
                                          [13]
        高，但工艺操作耗时长、成本高、效率低 。另有研究发                          声（功率：40 kHz，频率：600 W）提取1 h，再称定质量，用
        现，含苷类中药如黄芩 、菊花 等在采摘后均会进行热                          甲醇补足损失质量，混匀，用 0.22 μm 微孔滤膜滤过，取
                                  [15]
                           [14]
        烫处理，能杀死植物细胞、使酶灭活，提高药材质量。基                          续滤液，即得。
        于此，本课题组以滇龙胆主要有效成分马钱苷酸、獐牙                           2.1.4  专属性试验        取空白对照溶液（甲醇溶液）和
        菜苦苷、龙胆苦苷含量的总评归一值（OD 值）为考察指                        “2.1.2”项下混合对照品溶液、“2.1.3”项下供试品溶液适
        标，以热烫时间、热烫温度、干燥温度为考察因素，采用                          量，按“2.1.1”项下色谱条件进样分析，记录色谱图。结
        Box-Behnken 设计-响应面法优化滇龙胆产地初加工工                     果，空白对照无干扰（图略），供试品溶液与混合对照品
        艺，以期为后期改进、规范滇龙胆道地药材的产地初加                           溶液在相应位置有相同色谱峰，理论板数以獐牙菜苦苷
        工方法提供参考。                                           计不低于 2 000，且各色谱峰与相邻峰间的分离度均大
        1 材料                                               于1.5，表明本方法专属性强。色谱图见图1。
        1.1 仪器
                                                               1.5                              獐牙菜苦苷  龙胆苦苷
            Waters1525型高效液相色谱仪，包括1525二元高压                      1.0                            马钱苷酸
                                                              AU
        梯度泵、2707 型自动进样器、2998 二极管阵列检测器、                         0.5
                                                               0
        Breeze2分析系统（美国Waters公司）；AUY220型分析天                       0  2  4  6  8  10  12  14  16  18  20  22  24  26
                                                                                  t，min
        平（日本Shimadzu公司）；KQ5200E型超声波清洗器（昆                                      A.混合对照品溶液
        山市超声仪器有限公司）；HGZF-9053 型台式电热鼓风                          1.0
                                                               0.8                                 龙胆苦苷
        干燥箱（上海跃进医疗器械有限公司）；XMT-DA型电热                           AU  0.6                         马钱苷酸  獐牙菜苦苷
                                                               0.4
                                                               0.2
        恒温水浴锅（余姚市亚星仪器仪表有限公司）。                                  0
                                                                                     14
        1.2  药品与试剂                                               0  2  4  6  8  10  12 t，min  16  18  20  22  24  26
            滇龙胆药材于2019年1月采自云南省临沧市，经云                                             B.供试品溶液
        南省农业科学药用植物研究所张金渝研究员鉴定为龙                                           图1   高效液相色谱图
        胆科龙胆属植物滇龙胆（G. rigescens Franch. ex Hemsl）                     Fig 1 HPLC chromatograms
        的根茎；马钱苷酸对照品（批号：P01A9L67139，纯度：≥                    2.1.5  线性关系、检测限与定量限考察               取“2.1.2”项下
        98％）、獐牙菜苦苷对照品（批号：S02D7D26161，纯                     的混合对照品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件分别进样1、
        度：≥98％）、龙胆苦苷对照品（批号：R20O8F46237，纯                   5、10、15、20、30 μL进行分析，记录色谱图。以待测物进
        度：≥98％）均购自上海源叶生物科技有限公司；甲醇、                         样量（x，μg）为横坐标、峰面积为纵坐标（y）进行回归分
        甲酸为分析纯，水为纯化水。                                      析。另取“2.1.2”项下混合对照品溶液适量，用甲醇逐级
        2 方法与结果                                            稀释后进样分析，以信噪比3 ∶ 1、10 ∶ 1分别计算检测限、
        2.1 滇龙胆药材中主要有效成分的含量测定                              定量限。3种待测成分的回归方程、线性范围、检测限和
                                     [16]
        2.1.1  色谱条件      参考 Pan Y 等 的方法。色谱柱为               定量限见表1。
        Phenpmenex C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲          表 1   马钱苷酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷的回归方程、线
        醇（A）-0.1％甲酸水溶液（B），梯度洗脱（0～1.5 min，                        性范围、检测限和定量限
        7％A→10％A；1.5～15 min，10％A→26％A；15～24 min，           Tab 1 Regression question，linear range，detection
        26％A→54％A；24～36 min，54％A→90％A）；流速为                         limit and quantitation limit of loganic acid，
        1.0 mL/min；检测波长为243 nm；柱温为30 ℃；进样量为                        swertiamarin and gentiopicroside
        10 μL。                                                                            线性范围， 检测限， 定量限，
                                                           成分           回归方程          R 2
        2.1.2  混合对照品溶液的制备            分别精密称取马钱苷                                              μg    μg   μg
                                                           马钱苷酸   y＝2 038 184.257x－348 159.925 5  1.000 0  0.48～14.40  0.016  0.048
        酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷对照品4.8、5.2、10.4 mg，置于                  獐牙菜苦苷  y＝1 535 136.504x－514 336.812 8  0.999 9  0.52～15.60  0.017  0.052
        10 mL量瓶中，加入甲醇溶解并定容，制成马钱苷酸、獐                        龙胆苦苷   y＝1 195 578.931x－334 621.988 7  0.999 9  1.04～31.20  0.035  0.104


        中国药房    2020年第31卷第15期                                             China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 15  ·1831  ·
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